DNA粗提取与鉴定实验的各种试剂及用途这是寒假作业 高2的

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DNA粗提取与鉴定实验的各种试剂及用途
这是寒假作业 高2的

DNA粗提取与鉴定实验的各种试剂及用途这是寒假作业 高2的
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【实验十二】DNA的粗提取与鉴定
[日期：2007-12-14] 来源：桂林中学校园网 作者：毛敏 [字体：大 中 小]
【实验十二】DNA的粗提取与鉴定
实验原理
DNA在氯化钠溶液中的溶解度,是随着氧化钠的浓度的变化而改变的.当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时,DNA的溶解度最大,浓度为 0．14 mol／L时,DNA的溶解度最低.利用这一原理,可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出.
DNA不溶于95%的酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA.
DNA中含有脱氧核糖,能与二苯胺（沸水浴）反应生成蓝色物质,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂.
目的要求
1.学会DNA的粗提取和鉴定的方法.
2.观察提取出来的DNA物质的颜色和形状.
材料用具
材料：活鸡或鲜血鸡血.
仪器：离心机、恒温水裕锅、载玻片,玻璃棒,滤纸,滴管,量简（100 mL,l个）,烧杯（100 mL,l个,50 mL、500 mL各 2个）,试管（20 mL,2个）,漏斗,试管夹,纱布.
试剂：酒精的体积分数为95％的溶液（实验前置于冰箱内冷却24 h）,蒸馏水,柠檬酸钠的质量浓度为 0．1g／mL的溶液,氯化钠的物质的量浓度分别为 2 mol／L和0．015 mol/L的溶液,二苯胺试剂.
方法步骤
实验前需要制备鸡血细胞液（由教师完成）,制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为 0．1 g／mL的溶液（抗凝剂）100 mL,置于500 mL烧杯中.将宰杀活鸡流出的鸡血（约180 mL）注入烧杯中,同时用玻璃棒搅拌,使血液与柠檬酸钠溶液充分混合,以免凝血.然后,将血液倒入离心管内,用 1000 r／min的离心机离.2min,此时血细胞沉淀于离心管底部.实验时,用吸管除去离.心管上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞液.
1．提取鸡血细胞的细胞核物质
将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL,注入到50 mL烧杯中.向烧杯中加入蒸馏水20 mL,同时用玻璃棒充分搅拌5 min,使血细胞加速破裂.然后,用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL.取其滤液.
2．溶解细胞核内的DNA
将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶液40mL加入到滤液中,并摇动烧杯,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态.
3．析出含DNA的粘稠物
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现,注意观察丝状物呈什么颜色.继续加入蒸馏水,溶液中出现的粘稠物会越来越多.当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol／L）.
4．滤取含DNA的粘稠物
用放有多层纱布的漏斗,过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中,含 DNA的粘稠物被留在纱布上.
5．将DNA的粘稠物再溶解
取 1个 50 mL烧杯,向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL.用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中,用玻璃择不停地搅拌,使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中.
6．过滤含有DNA的氯化钠溶液
取1个100 mL烧杯,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液.取其滤液,DNA溶于滤液中.
7．提取含杂质较少的DNA
在上述滤过的溶液中,加入冷却的、酒精的体积分数为 95％的溶液 50mL（使用冷却的酒精,对DNA的凝集效果较佳）,并用玻璃棒搅拌,溶液中会出现含杂质较少的丝状物.用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分.这种丝状物的主要成分就是DNA .注意观察丝状物是什么颜色的.
8．DNA的鉴定
取两支20 mL的试管,各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol／L的溶液5 mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解.然后,向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂.混合均匀后,将试管置于沸水中加热 5 min,待试管冷却后,观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化.将观察的结果填写在《实验报告册》上.
结论
步骤8的2支试管中溶液颜色的变化说明了什么?将得出的结论填写在《实验报告册》上.