荧光分光光度计测试步骤是怎么样的
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/23 15:05:50
荧光分光光度计测试步骤是怎么样的
荧光分光光度计测试步骤是怎么样的
荧光分光光度计测试步骤是怎么样的
测试步骤：
(一)样品准备
1.液体样品根据用户提供的技术指标,检查浓度范围是否合适,如果需要稀释,则要考虑所需溶剂类型和稀释倍数.
2.固体样品均匀粉末、片状或具有光滑平面的块状样品,均可直接测定.
(二)操作步骤
1.开机：接通电源,打开主机开关,点燃(打开)光源后,根据说明书要求启动计算机.
2.检测前准备：参照仪器说明书,在20天内至少进行一次激发校准和发射校准,检测前仪器应预热.
3.工作条件的选择：环境温度应在20℃±5℃;相对湿度不大于70%;电源稳定,无磁场、电场干扰.根据样品的特性及荧光强度,选择合适的仪器工作条件(如狭缝、PM增益、响应时间等).
4.基本测定
(1)荧光激发光谱测定
设置仪器参数,扫描发射波长,找到maxλem,以此为发射波长,记录发射强度作为激发波长的函数,便得到激发光谱.
(2)荧光发射光谱测定
设置仪器参数,扫描激发波长,找到maxλex,以此为激发波长,记录发射强度与发射波长间的函数关系,便得到荧光发射光谱.
(3)差谱测定
设置仪器参数,选择合适的工作方式,测定背景溶液的发射光谱并储存起来,在一定的工作方式下,扫描样品溶液的发射波长,得到当时的光度值和储存的背景值之间的差示值,即差谱.
(4)峰面积积分
选择适当的工作方式,对样品溶液进行积分操作,即得到峰面积积分.
(5)荧光强度
选择合适的测量参数,设置λex、λem,采用定点读数或扫描方式,即可测得所选波长处的荧光强度.
(6)定量测定
配制一系列已知浓度的标准溶液,在一定的测定条件下,设置λex、λem,按照由稀至浓的次序,测定标准溶液的荧光强度,绘制荧光强度—浓度的工作曲线,不改变仪器参数测定未知溶液的荧光强度,由工作曲线即可求出未知溶液的浓度.
(三)分析结果的表述
1.荧光激发光谱、发射光谱以及其他光谱由仪器控制电脑直接绘出.
2.峰面积积分、荧光强度由仪器控制电脑计算显示.
3.定量测试：在相同的测定条件下,测定一系列已知浓度的标准溶液的荧光强度,绘制出荧光强度-浓度的工作曲线.浓度未知的溶液的荧光强度测定后,由工作曲线求出该溶液的浓度.
(四)注意事项
1.在实验开始前,应提前打开仪器预热,并配制好所需的溶液,对于已经配制好的溶液,在不用时放在4℃冰箱中保存,放置时间超过一星期的溶液要重新配制.
2.实验所用的样品池是四面透光的石英池,拿取的时候用手指掐住池体的上角部,不能接触到四个面,清洗样品池后应用擦镜纸对其四个面进行轻轻擦拭.
3.在测试样品时,注意荧光强度范围的设定不要太高,以免测得的荧光强度超过仪器的测定上限.
4.实验结束后,要及时的清理台面,处理废液,清洗和放置好样品池,将下次要用的溶液放回冰箱,并且按规定登记实验记录,养成良好的实验习惯.