影响PCR扩增结果的因素请问影响PCR扩增结果好坏的因素有哪些,最重要的因素又是什么呢?可能我问的不是很清楚，其实主要是想问操作中需要注意的事项，引物是已经确定的，呵呵，不好意
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/25 07:02:36
影响PCR扩增结果的因素请问影响PCR扩增结果好坏的因素有哪些,最重要的因素又是什么呢?可能我问的不是很清楚，其实主要是想问操作中需要注意的事项，引物是已经确定的，呵呵，不好意
影响PCR扩增结果的因素
请问影响PCR扩增结果好坏的因素有哪些,最重要的因素又是什么呢?
可能我问的不是很清楚，其实主要是想问操作中需要注意的事项，引物是已经确定的，呵呵，不好意思，我以前没有做过这方面的实验，觉得有点盲目，请多多指教。
影响PCR扩增结果的因素请问影响PCR扩增结果好坏的因素有哪些,最重要的因素又是什么呢?可能我问的不是很清楚，其实主要是想问操作中需要注意的事项，引物是已经确定的，呵呵，不好意
我个人感觉对PCR影响最大的是模板质量和退火温度,至于其他的影响因素那就太多了,模板纯度浓度,引物质量,体系中的物质（buffer,酶,Mg2+,dntp浓度）,退火和延伸温度.一般来讲,引物从reference上找,然后参照reference上的体系稍作调整即可,有需要直接HI我吧,我不一定在,看到给你回
最重要的应该就是引物的特异性了,要不然连PCR出来的片段是不是所需的片段都不能确定...
引物的设计很有技巧的,既要保证特异性,又不能过长,两端的引物退火温度还要相似才好.现在有很多软件可以帮助你设计软件,推荐Primer Premier 5,很好用~
ps 注意事项就是东西都要加全了,一般要设计对照组,PCR仪的稳定性和你使用的不同公司的酶的效率很不同,不成功也不要灰心.反应的...
全部展开
最重要的应该就是引物的特异性了,要不然连PCR出来的片段是不是所需的片段都不能确定...
引物的设计很有技巧的,既要保证特异性,又不能过长,两端的引物退火温度还要相似才好.现在有很多软件可以帮助你设计软件,推荐Primer Premier 5,很好用~
ps 注意事项就是东西都要加全了,一般要设计对照组,PCR仪的稳定性和你使用的不同公司的酶的效率很不同,不成功也不要灰心.反应的条件不是所有都一样的,你要看你使用的那个公司的酶给的说明书,上面很详细~生物实验失败还是很常见的,千万不要轻易放弃,耐心找原因,祝你成功~!
收起
引物的特异性
退火温度
目的片段长短