为什么我们基因克隆老失败我们做的是拟南芥中一些基因cds的克隆,在设计引物时加上酶切位点,PCR之后通过酶切与载体相连.但是为什么老是失败,起初我们直接切得PCR产物,由于那样切没切开
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/09 01:53:48
为什么我们基因克隆老失败我们做的是拟南芥中一些基因cds的克隆,在设计引物时加上酶切位点,PCR之后通过酶切与载体相连.但是为什么老是失败,起初我们直接切得PCR产物,由于那样切没切开为什么我们基因克
为什么我们基因克隆老失败我们做的是拟南芥中一些基因cds的克隆,在设计引物时加上酶切位点,PCR之后通过酶切与载体相连.但是为什么老是失败,起初我们直接切得PCR产物,由于那样切没切开
为什么我们基因克隆老失败
我们做的是拟南芥中一些基因cds的克隆,在设计引物时加上酶切位点,PCR之后通过酶切与载体相连.但是为什么老是失败,起初我们直接切得PCR产物,由于那样切没切开看不出来,所以我们先把PCR产物连在T载体上再切T载体,但是且过之后还是老连不上.有时候转化都长出菌落了但是菌落PCR却做不出来.我们用的T载体有pMD18-T pGM-T pEASY-T.请高人给一些克隆方面的指点吧,我们现在的进度一个月能做成一个克隆就不错了.
为什么我们基因克隆老失败我们做的是拟南芥中一些基因cds的克隆,在设计引物时加上酶切位点,PCR之后通过酶切与载体相连.但是为什么老是失败,起初我们直接切得PCR产物,由于那样切没切开
1 建议你直接切PCR产物,在酶切位点两端加2~3个保护碱基再切.这样避免两次纯化的麻烦.我都是这么做的.
2 你的T载体连接成功了么?就是有没有拿到重组T载体?
3 你用的是Taq还是高保真聚合酶?如果是Taq的话当心是在引物区或酶切位点造成点突变使得切不动.
用TOPO克隆吧。
反正我自己做的时候是 pcr切下来之后做纯化,然后再连接T载体。然后转化,再涂板。我比较落后,还用的是蓝白斑 。就可以了。
为什么我们基因克隆老失败我们做的是拟南芥中一些基因cds的克隆,在设计引物时加上酶切位点,PCR之后通过酶切与载体相连.但是为什么老是失败,起初我们直接切得PCR产物,由于那样切没切开
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反对克隆(或克隆人)的理由和原因我们老师要做个活动 我们是反方 是反对克隆的 急用关于反对克隆或克隆人的资料 急用
翻译:失败对我们是有好处的,我们得祝福灾难,我们是灾难之子.
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