pcr技术最关键的地方、?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/17 17:38:31
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酶、
引物
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引物现在设计都是靠软件的，输入上下游各超过你目的片段的500bp以上，打分值一般都会很好的，选择一下最适合的，一般TM值大于55度不超过60度。但是我认为PCR关键是批出特异的基因条带，首先要保证样品没有基因组污染，因为我们是靠RNA逆转录成cDNA扩增的，因此如果有基因组污染的话，对后续的测序，表达量的观察都有很大的影响。但是我们要是设计跨内含子的引物，就可以避免基因组污染的扩增物。另外如果片段...
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引物现在设计都是靠软件的，输入上下游各超过你目的片段的500bp以上，打分值一般都会很好的，选择一下最适合的，一般TM值大于55度不超过60度。但是我认为PCR关键是批出特异的基因条带，首先要保证样品没有基因组污染，因为我们是靠RNA逆转录成cDNA扩增的，因此如果有基因组污染的话，对后续的测序，表达量的观察都有很大的影响。但是我们要是设计跨内含子的引物，就可以避免基因组污染的扩增物。另外如果片段过长，或是要拿到基因全长的扩增一般都很难，因为在非翻译区的扩增，CG含量都很高，可以试着用巢式PCR，超过1000bp的尽量用LATaq酶，因为要保证碱基准确，为了后续测序实验做准备。
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