质粒碱性抽提中使用EDTA有什么用

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/28 11:23:17
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去哪里找最出色的生命科学学术交流论坛?>>> 碱法质粒抽提用到三种溶液：
溶液I,50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA,pH 8.0；
溶液II,0.2 N NaOH / 1% SDS；
溶液III,3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸
让我们先来看看溶液I的作用任何生物化学反应,首先要控制好溶液的pH,因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液,是再自然不过的了那么50 mM葡萄糖是干什么的呢?说起来不可思议,加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部因此,如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言,几乎没有任何影响所以说溶液I中葡萄糖是可缺的.那么EDTA呢?大家知道EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,配在分子生物学试剂中的主要作用是：抑制DNase的活性,和抑制微生物生长在溶液I中加入高达 10 mM 的EDTA,无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉如果不加EDTA,其实也没什么大不了的,只要不磨洋工,只要是在不太长的时间里完成质粒抽提,就不用怕DNA会迅速被降解,因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA如果哪天你手上正好缺了溶液I,可不可以抽提质粒呢?当前共有 0 人对最佳答案进行了补充或评论.查看全部评论｜对最佳答案进行评论或补充

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