长pcr引物设计以及扩增条件我有个环状的大概35kb的基因组需要全部扩增.我想分几段来扩增,每段大概5000-8000bp左右吧.本人有takara公司的la-taq体系,需要怎样设计引物啊?有哪些原则,有这方面的

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/11/16 18:51:33

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长pcr引物设计以及扩增条件
我有个环状的大概35kb的基因组需要全部扩增.我想分几段来扩增,每段大概5000-8000bp左右吧.本人有takara公司的la-taq体系,需要怎样设计引物啊?有哪些原则,有这方面的专家吗?

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引物长度和专一性
常见的引物长度为18-30个碱基.短的引物（≤15碱基）能非常高效地结合,但是它们的专一性不够.较长的引物能提高专一性,然而退火效率低,从而导致PCR产量低下.同时应避免编码单一序列和重复序列的引物.
平衡GC含量,避免GC-和AT-富集区域
引物的GC含量应介于40%～60%之间.应避免聚-（dC）-或聚（dG）-区域,因为它们会降低退火反应的专一性.聚-（dA）-和聚（dT）-也应避免,因为这样会形成不稳定的引物-模板复合物,从而降低扩增效率.

引物设计遵循常规就可以，注意别太短，还有尽量减少错配；扩增程序可以看说明，5~8K没问题，不难扩增，注意算好延伸时间就好，我之前做过一段20K左右的扩增，如果您实验中有问题可以再联系我私聊。

如果实验室有钱直接给公司做primer walking就行

长pcr引物设计以及扩增条件我有个环状的大概35kb的基因组需要全部扩增.我想分几段来扩增,每段大概5000-8000bp左右吧.本人有takara公司的la-taq体系,需要怎样设计引物啊?有哪些原则,有这方面的对于一段有重复序列的片段如何扩增,只是一个基因的中间的部分序列,准备扩增做overlap.我在两端设计的无配对引物,无法扩增目的条带,不知对PCR 条件有什么要求? PCR在扩增长片段的设计引物时需要注意什么? PCR在扩增长片段的设计引物时需要注意什么? pcr扩增中,如何设计引物? 我有上下游引物,如何知道我扩增出来的序列是什么?E-PCR是不是可以实现这个功能?我设计了人源的AKT1引物看能否用来扩增小鼠的AKT1 用基因组DNA做模板进行PCR扩增,设计引物所选序列也用cDNA为模板有什么不同是用这两个模板做pcr，在设计引物时，设计引物所用的序列有区别么 PCR扩增不出就引物有问题吗? PCR扩增不出就引物有问题吗? PCR扩增目标基因,完全没有条带.是不是设计的引物太短?引物只有10个碱基和模板配对 pcr引物的设计有哪些要求我要进行PCR扩增,自己不会设计引物,主要是primer不太会用.打算引用国外文献上的引物设计,但是同一个基因,PubMed上不同文献有不同的引物设计,目前该基因我已经发现了好几种版本的引物设计. PCR的扩增基因的引物是什么设计pcr体系质粒扩增扩增片段1.8kb两引物都是87碱基pfu酶怎样设计预变性变性退火延伸的时间和温度我的引物gc含量大约为0.6 因为是设计的同源臂所以比较长如果要使用PCR扩增一段已知的DNA序列,要如何设计引物 PCR扩增的产物中是不是也含有引物设计中的序列啊 PCR不能扩增出目的条带,用的是文献中提供的引物总是扩增不出来,目的片段279bp,我用的条件是94℃,5min；94℃,30s,50℃,30s,72℃,45s,30个循环；72℃,5min.其中退火温度有试过56℃,58℃,都不行,只有引 PCR扩增正向引物,反向引物是什么?怎么结合的?