请问生物秀的朋友,细胞培养用胰蛋白酶溶液如何配制与消毒?

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/25 15:55:45
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请问生物秀的朋友,细胞培养用胰蛋白酶溶液如何配制与消毒?
博凌科为生物科技-为你胰蛋白酶溶液的配制与消毒:胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散.不同的组织或者细胞对胰 酶的作用反应不一样.胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在pH为8.0、温度为37℃时,胰酶溶液的作用能力最强.使用胰酶时,应把握 好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤.因Ca2+、 Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks 液.终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用.1.称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度为0.25%,用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水(若用双蒸水需要调PH到7.2左右)或PBS(D- hanks)液中.搅拌混匀,置于4℃内过夜.2.用注射滤器抽滤消毒:配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器(0.22微米微孔滤膜)抽滤除菌.然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用.

我配的胰酶不含EDTA的哦,因为我的细胞很容易消化,不需要EDTA促溶。我就是称取0.25g胰酶粉剂,溶入100ml的D-hanks液里面,然后用一次性注射器和一次性滤头过滤分装。再用封口胶封口,放入-20度冰箱保存咯。

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