怎样确定一个基因是否被敲出
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/18 06:25:20
怎样确定一个基因是否被敲出
怎样确定一个基因是否被敲出
怎样确定一个基因是否被敲出
很简单,直接以靶基因的敲除位点为模板做PCR,如果是阴性,就是敲除成功.或者是提RNA后做RT-PCR.由于基因敲除往往不是敲除的整段基因,所以引物设计的时候要针对敲除的那个部位.
楼上说的只能表明外源基因的进入,但不能证明目的基因已经被去掉了.
看你用什么生物载体做了，方法不一而足。给你举个细菌的例子，一般会用一种抗药选择基因替代在原敲除基因的位置，这样，只要经过基因敲除的细菌，都会带有抗药性，可以再选择平板生长。在其他生物中，我们还可以用荧光基因等代替敲除基因等进行筛选，反正原理基本如此方法有很多。
请问楼上，基因敲除你不做筛选怎么培养？...
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看你用什么生物载体做了，方法不一而足。给你举个细菌的例子，一般会用一种抗药选择基因替代在原敲除基因的位置，这样，只要经过基因敲除的细菌，都会带有抗药性，可以再选择平板生长。在其他生物中，我们还可以用荧光基因等代替敲除基因等进行筛选，反正原理基本如此方法有很多。
请问楼上，基因敲除你不做筛选怎么培养？
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可以从基因组、表达、蛋白水平分别检测:
1:以启动子或者标记基因为探针做southern 杂交。(PCR也可以，但不够准确)
2:以野生型（或者转基因阴性）为对照，检测该基因的表达量是否降低。（RT-PCR、realtimePCR、northern blotting）
3:合成该基因的抗体，以野生型为对照做western检测。...
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可以从基因组、表达、蛋白水平分别检测:
1:以启动子或者标记基因为探针做southern 杂交。(PCR也可以，但不够准确)
2:以野生型（或者转基因阴性）为对照，检测该基因的表达量是否降低。（RT-PCR、realtimePCR、northern blotting）
3:合成该基因的抗体，以野生型为对照做western检测。
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