显示乙酰胆碱酯酶的方法
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/23 02:34:34
显示乙酰胆碱酯酶的方法
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乙酰胆碱酯酶 乙酰胆碱酯酶 acetylcholine esterase
简称AchE（也称真性胆碱酯酶）：活性高,选择性水解Ach的必需酶,能使乙酰胆碱（ACh）水解成胆碱和乙酸.
乙酰胆碱酯酶 acetylcholine esterase EC3.1.1.7.胆碱酯酶中的I型（即true choli-neesterase）废物特异性高,因为只分解以乙酰胆碱为中心的狭窄范围的底物,故特此这样称呼.
一、AchE在神经肽代谢中的作用
Chubbe等的研究证明,AchE具有羧肽酶和氨肽酶的活性.在体外,AchE能水解脑啡肽（Enk）和P物质（SP）,但不能水解生长抑素（Som）和血管加压素（VSP）等.进一步的研究证明,AchE作为肽酶,其水解肽的活性部位和作为酯酶的活性部位不同.值得注意的是,神经系统许多非胆碱能的,含大量AchE的神经元同时亦含有各种神经肽类物质.如脊髓背根节的SP能细胞即是AchE强阳性.
最近的研究显示,高度纯化的来自电鳗电器官或牛血清的AchE具有蛋白酶样或外切酶的活生.对于血清蛋白质,AchE能发挥C端残基的清除作用.此外,AchE的蛋白酶样作用还得到分子生物学证据的支持,氨基酸分析显示,AchE蛋白质分子与蛋白酶样内切酶以及血清羧肽酶的氨基酸序列相似.在它们的C端36个残基范围内,有40%氨基酸序列和蛋白酶的活性片段相同.
二、AchE的电生理和行为效应
（一）AchE的树突/胞体释放
树突/胞体释放是神经分泌的一种特殊形式.黑质多巴胺神经元属非胆碱能,似乎很少接受胆碱能传入投射,但黑质细胞内含有大量AchE.研究发现,脑内的AchE可以有膜结合型和非膜结合型（可溶的）两种形式,黑质多巴胺能神经元的树突或胞体能够将AchE（可溶型）分泌到细胞外液中,称为AchE树突释放现象.显然,AchE的树突释放现象和Ach的释放无关.因为应用胆碱能阻断剂或拮抗剂并不能影响AchE的树突释放.同时,AchE在脑室内的分布以及脑脊液中的含量都和Ach不一致,由于电镜观察在黑质内没有发现树树突触的存在,所以黑质内经树突或胞体释放出的物质能相对自由的扩散.因此,在黑质AchE可能发挥一种非突触性的调节作用,以调节黑质一纹状体投射神经元的胞体对其远端树突传入信号的敏感性.
（二）AchE的电生理及行为效应
研究发现细胞外AchE能改变黑质多巴胺神经元的电活性及动物的运动行为.大剂量应用时,AchE抑制黑质多巴胺能细胞的自发放电,但在生理学剂量时它能增加黑质细胞的放电频率.Creenfield通过体外培养细胞内记录方式发现在灌流中加入AchE能引起黑质细胞膜的显著超极化,并伴有膜输入电阻的降低,用不可逆性的胆碱酯酶抑制剂苏曼（soman）预先处理AchE,然后将其加入脑片培养液中,不能改变AchE对膜的电学性质的影响.上述实验表明,AchE对黑质多巴胺能神经元膜有电学特性的作用与AchE水解Ach作用无关,并还具有高度结构特异性.
应用微电极直接将AchE注射到大鼠的黑质内,结果引起大鼠的运动行为改变,表现为行动迟缓和木僵状态.一次AchE注射后大鼠的行为变化可持续相当长的时间,其机制尚不清楚.推测在生理状态下,AchE从黑质多巴胺能细胞的树突释放后,能对其本身和邻近细胞的生理活动产生一定影响,这可能是一种新的神经元之间局部联系或自身后馈调节的方式.