关于含目的基因受体的筛选的问题将切割后的质粒和目的基因片段混合,会出现三种情况：质粒自连,目的基因自连,质粒和目的基因连在一起,而利用质粒上的标记基因如四环素的抗性基因进行
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 07:14:33
关于含目的基因受体的筛选的问题将切割后的质粒和目的基因片段混合,会出现三种情况：质粒自连,目的基因自连,质粒和目的基因连在一起,而利用质粒上的标记基因如四环素的抗性基因进行
关于含目的基因受体的筛选的问题
将切割后的质粒和目的基因片段混合,会出现三种情况：质粒自连,目的基因自连,质粒和目的基因连在一起,而利用质粒上的标记基因如四环素的抗性基因进行筛选,只能排除含目的基因自连的受体,不能排除质粒自连的的受体,那为什么书上说没有接纳重组DNA分子的细胞就不能在培养基上生存,含有质粒重组的细胞明明也能生存,那不就无法起到很好的筛选作用了,我不知道是我的想法错了,还是确实存在这么一个情况,
关于含目的基因受体的筛选的问题将切割后的质粒和目的基因片段混合,会出现三种情况：质粒自连,目的基因自连,质粒和目的基因连在一起,而利用质粒上的标记基因如四环素的抗性基因进行
你所说的切割后会出现三种连接情况是使用单酶酶切,这种情况下会使用碱性磷酸酶处理载体,将3‘-OH变为3’-P,3‘-P和5'-P不会形成磷酸二酯键,防止了自环化；另一个比较常用的方法就是使用双酶切,形成不同的末端,也可以防止自环化
这其中有个抗原筛选的过程，目的基因能够表达一种特定的蛋白质，在培养基中加入这种蛋白质的抗体，产生颜色反应，就能识别出来，没有目的基因的质粒是不会产生反应的
质粒链较长，连接效率低，用较高的目的基因:质粒比例可以进一步减少自连现象，有些质粒用 CIAP或者 SAP 之类的碱性磷酸酶做去磷酸化处理，去磷酸化之后的DNA不能自连，只能和未去磷酸化的DNA相连，几乎完全消除了质粒自连的可能。
有些质粒的多克隆位点位于耐药基因内，如果目的基因插入成功，就会使耐药基因失活，所以只有插入目的基因的质粒能够在抗生素板子上生长，这就是你提到的书中的情况。不过这种质粒极少使用，你描述的例子才是实际操作中经常遇到的真实情况。为了减少质粒自连，通常使用双酶切进行克隆。...
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有些质粒的多克隆位点位于耐药基因内，如果目的基因插入成功，就会使耐药基因失活，所以只有插入目的基因的质粒能够在抗生素板子上生长，这就是你提到的书中的情况。不过这种质粒极少使用，你描述的例子才是实际操作中经常遇到的真实情况。为了减少质粒自连，通常使用双酶切进行克隆。
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