如何选择转基因小鼠的报告基因

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 23:28:27
如何选择转基因小鼠的报告基因如何选择转基因小鼠的报告基因如何选择转基因小鼠的报告基因做小鼠胚胎发育的研究人员一般喜欢用LacZ,也就是将LacZ置于一个启动子的调节之下.用LacZ可以进行胚胎全身染色

如何选择转基因小鼠的报告基因
如何选择转基因小鼠的报告基因

如何选择转基因小鼠的报告基因
做小鼠胚胎发育的研究人员一般喜欢用LacZ,也就是将LacZ置于一个启动子的调节之下.用LacZ可以进行胚胎全身染色(whole body staining),这样可以了解一个基因在体内的表达谱全貌.如果做细胞跟踪,比如免疫细胞,神经细胞等,一般喜欢用荧光蛋白.这样一是容易对细胞进行分离(比如FACS)和体外分析,二是容易对分离的细胞进行体内追踪(比如Adoptive transfer).早些年用的最多的是EGFP和EYFP.有的时候,我们需要将两种不同的reporter小鼠交配在一起,研究两个基因的关系,这时可以将两个基因采用不同的荧光蛋白进行标记,也就是做两种不同的模式小鼠.因为早期大家多是用EGFP,现在可以多做一些其它荧光蛋白的报告基因小鼠,以便跟以前研发的EGFP小鼠结合起来研究.zsGreen和EGFP,EYFP都是绿色荧光.EGFP和EYFP很难区分开.zsGreen是一个比较稳定的绿色荧光蛋白.DsRed和TdTomato都是红色荧光.这两种荧光蛋白都有报告基因模式小鼠发表.TdTomato是一个信号非常强的荧光蛋白,目前已经有报告基因小鼠发表,对细胞/小鼠也没有明显的毒性.相信以后会有越来越多的小鼠用TdTomato来做报告基因.虽然mRFP和mCherry是两个非常好的荧光蛋白,但由于它们需要584nm的激发光,所以一般的FACS仪器不能检测到信号,需要用到LSRII这样的仪器,而很多实验室可能没有这样的仪器.也有用EBFP,ECFP做细胞实验的,但用到小鼠上的比较少.比如需要用到紫外光来激发.如果想在一个小鼠里表达两种荧光蛋白,最好是用两种分得比较开的,比如,最好不要同时用EGFP和EYFP.
HuCD2和Thy1.1是细胞表面受体.HuCD2因为去掉了C-term序列,使得其失去了信号传导的功能.那什么时候会用这两种分子呢?比如我们想研究一个细胞内蛋白基因(比如转录因子)的功能,经常需要把表达这个蛋白的细胞分离纯化出来.这个时候可以将HuCD2或Thy1.1报告基因放置在这个细胞内蛋白基因启动子下(比如加一个IRES-Thy1.1),这样所有表达这个细胞内蛋白的细胞都会在细胞表面表达Thy1.1.这样就可以用anti-Thy1.1抗体将这一群细胞分离出来,进行后续研究.当然也可以用anti-Thy1.1抗体进行组织切片的免疫荧光检测.
HA、FLAG、Biotin等是细胞和生化实验中常用的标签多肽或蛋白.在Western blot,免疫沉淀(Immunoprecipitation)等实验中经常用到,因为有非常特异的HA、Flag抗体.Biotin可以跟生物素(Streptavidin)直接结合并用于免疫沉淀.在模式小鼠中,这些标签多肽或蛋白可以与要研究的蛋白做成融合蛋白.这种模式小鼠最常被用到的是Chip-chip实验.比如要研究一个转录因子的功能,就需要知道这个转录因子在细胞内(正常或刺激条件下)结合到染色体基因组DNA的位置以及结合序列.我们知道,特异性好、亲和力高的抗转录因子的抗体非常不容易得到或制备.这个时候可以将标签多肽(比如FLAG)放在转录因子的C-term,做成融合蛋白.刺激细胞之后,对细胞进行化学交联,并破碎细胞以及基因组DNA,然后用anti-FLAG抗体作免疫沉淀,将转录因子沉淀下来.最后分析这些转录因子所结合的DNA片段序列,从而找到该转录因子的在基因组上的识别序列,也就找到了该转录因子的作用基因.
荧光素酶做报告基因模式小鼠,一般是为了做活体成像实验.比如在一个细胞因子启动子下面放置荧光素酶基因.免疫小鼠之后,有些细胞或器官表达该细胞因子同时表达荧光素酶.通过注射荧光素酶底物可以检测荧光在小鼠体内的分布,从而得出该细胞因子在不同免疫条件下的表达情况.荧光素酶在癌症研究中也经常用.通过荧光活体成像可以研究肿瘤细胞的发生和转移.
报告基因很多.这里只是一点简要的介绍.不同的模式小鼠根据实验目的不同,可以做非常不同的设计.

如何选择转基因小鼠的报告基因 如何选择转基因小鼠的报告基因 转基因小鼠与基因敲出小鼠的差异请问:转基因小鼠与基因敲出小鼠之间有什么差异呀? 转基因小鼠的基因型如何鉴定 如何利用小鼠胚胎干细胞制作纯合转基因小鼠 在培育转基因小鼠时,为什么要将已经转染上目的基因的囊胚期胚胎中注射ES细胞得嵌合体?如果直接用已经转染上目的基因的胚胎假孕也可以得到转基因小鼠啊. 转基因小鼠在比较医学的应用 在“转基因超级鼠”的试验中,为何小鼠本身的基因不影响超级鼠的性状? 谁能看懂这张转基因检测报告单,结果是转基因还是非转基因?检测报告里面的 内源参照基因 为“检出” 这个结果代表的是非转基因还是转基因? 我有一个转植物的载体,转基因抗性标记基因是barstar,请问如何选择除草剂进行抗性筛选?浓度用多少? 将人的生长素基因转移到小鼠体内,此转基因技术的受体细胞A去和卵细胞 B受精卵细胞 基因敲除的糖尿病小鼠有哪几种? 那家做转基因小鼠服务的比较好 绿色荧光转基因小鼠是怎么来的 高一生物书上的小鼠肥胖与HMGIC基因有关是如何体现基因具有遗传效应的 关于转基因我们需要将一只pet公鼠一只flox雌鼠和一只c57雌鼠合笼,最后得到基因型为pet/flox-lmx1b-/-的小鼠,我不太明白为什么要用两只雌鼠,pet-cre为转基因小鼠,flox-lmx1b为基因敲除小鼠 如何检验转基因抗虫棉具有抗性基因 怎么检测转基因植物后代遗传如何检测外源基因在转基因植物的后代中的遗传