有个网友聊天时说了句：EB
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/25 13:52:57
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EB（Ethidium bromide,溴化乙锭）
溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA.溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄.
观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色,溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团.它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性.在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子.当染料分子插入后,其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用.这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近,导致与DNA结合的染料呈现荧光,其荧光产率比游离溶液中染料有所增加.DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料,而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射.这两种情况下,被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来.由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍,所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭（0.5ug/ml）时,可以检测到少至10ng的NDA条带.
溴化乙锭可以用来检测单链或双链核酸（DNA或RNA）.但是染料对单链核酸的亲和力相对较小,所以其荧光产率也相对较低.事实上,大多数对单链DNA或RNA染色的荧光时通过染料结合到分子内形成较短的链内螺旋产生的.
尽管在该染料存在的情况下,线状DNA的电泳迁移率约降低15%,因此,当需要知道DNA片段的准确大小（如DNA限制酶酶切图谱的鉴定）,凝胶应该在无EB情况下电泳,电泳结束后用EB染色.染色完毕后,通常不需要脱色.但是在检测小量DNA（小于10ng）片段时,通常要将染色后的凝胶进行脱色.
溴化乙锭的损害
溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配.溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性!
SYBR Green I 和溴化乙啶（EB）Ames 测试结果显示EB容易引起有机体突变.(Singer et al.,Mutat.Res.199,439:37- 47.)
溴化乙锭溶液的净化处理
由于溴化乙锭具有一定的毒性,实验结束后,应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置,以避免污染环境和危害人体健康.
(1) 对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液,可如下处理：
①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml；
②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4,混匀,再加入等量的25mol/L HCl,混匀,置室温数小时；
③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH,混匀并废弃.
(2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理：
① 按1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时；
② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃.
*EB=Employee Benefit 企业员工福利计划.
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