蛋白析出问题我的是HIS标签蛋白,超声裂解菌体后12000离心,SDS-PAGE检测目的蛋白大量存在于上清,于是按可溶性蛋白镍柱纯化,纯化出以后室温放置一段时间或是放于-20拿出后蛋白析出,而且一直

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/24 20:26:03
蛋白析出问题我的是HIS标签蛋白,超声裂解菌体后12000离心,SDS-PAGE检测目的蛋白大量存在于上清,于是按可溶性蛋白镍柱纯化,纯化出以后室温放置一段时间或是放于-20拿出后蛋白析出,而且一直蛋

蛋白析出问题我的是HIS标签蛋白,超声裂解菌体后12000离心,SDS-PAGE检测目的蛋白大量存在于上清,于是按可溶性蛋白镍柱纯化,纯化出以后室温放置一段时间或是放于-20拿出后蛋白析出,而且一直
蛋白析出问题
我的是HIS标签蛋白,超声裂解菌体后12000离心,SDS-PAGE检测目的蛋白大量存在于上清,于是按可溶性蛋白镍柱纯化,纯化出以后室温放置一段时间或是放于-20拿出后蛋白析出,而且一直溶解不回去.后来,将沉淀蛋白用8mol尿素溶解也不行.
应该不会是浓度过大的问题,可能因为析出,考马斯亮蓝测剩余溶液蛋白浓度很低。

蛋白析出问题我的是HIS标签蛋白,超声裂解菌体后12000离心,SDS-PAGE检测目的蛋白大量存在于上清,于是按可溶性蛋白镍柱纯化,纯化出以后室温放置一段时间或是放于-20拿出后蛋白析出,而且一直
看起来是构象不正确,可能是折叠或修饰的问题.如果只要求可溶,纯化后稀释一下,也许就不沉淀了.也可以试试加一些稳定剂,如甘油,DTT,分子伴侣等.
如果要正确折叠的,就比较麻烦,可以用真核表达系统试试.Thermo有一种用人细胞裂解液表达的系统,自称修饰系统很好.

蛋白析出问题我的是HIS标签蛋白,超声裂解菌体后12000离心,SDS-PAGE检测目的蛋白大量存在于上清,于是按可溶性蛋白镍柱纯化,纯化出以后室温放置一段时间或是放于-20拿出后蛋白析出,而且一直 his标签蛋白是什么 His,myc,eGFP,flag,HA蛋白标签的基因序列 求助蛋白表达中的his标签的作用 融合蛋白 His标签问题我的目的基因片段在pET28a载体中是这样的一个情况 -----CATCATCATCATCATCAC(His-tag)-------14bp-------ATG(后面是我的目的基因片段)-------这样的话表达的蛋白会有His-tag吗? 融合蛋白肽指纹图谱分析,该蛋白为带有his标签的多角体融合目的蛋白(his-多角体蛋白-目的蛋白).您说可以用多角体蛋白做个指纹,我现在手上有另一人做的多角体的二级质谱结果,即指纹图 GST纯化蛋白目前我的融合蛋白是40多Kd,GST标签是26.44,14点多Kd的目的蛋白,用GST纯化效果会如何,用HIS好吗.请介绍一下GST标签应用中的优点所在, 组氨酸标签纯化蛋白挂不上柱子,蛋白的量还挺高的 6*his标签作用在基因工程中,重组蛋白通才以融合蛋白的形式表达,其中常用一种6*his标签.目的是什么?极其原理? GST标签蛋白具体的大小 番茄蛋白面膜中的蛋白是煮熟的蛋白吗? 融合蛋白肽指纹图谱分析,该蛋白为带有his标签的多角体融合目的蛋白(his-多角体蛋白-目的蛋白)这样的融合蛋白能否进行指纹分析得出一定的结果,如果能,应该从哪种角度去分析才有意义 用western检测真核表达的带有flag标签的融合蛋白时,能用目的蛋白本身的抗体进行检测,但用flag抗体确无法在确保western条件没有问题的情况下,我在检测N端带有flag标签的融合蛋白时,用目的 在免疫共沉淀过程中的问题~加蛋白标签我用加了GFP或者Myc标签的表达质粒表达蛋白,然后做CO-IP!用抗GFP抗体将复合物拉下来可以不?GFP会不会和细胞内其他蛋白相互作用也形成复合物而影响结 带HIS蛋白用镍柱纯化后的保存问题我的蛋白在纯化后放到-70度冰箱(未用液氮速冻)等第二天取出来时发现好多絮状沉淀,恢复到室温后也不能溶解,我认为是发生了蛋白变性.另外我需要的是 为什么用带HIS标签的镍柱纯化试剂盒纯化蛋白后包ELISA可以避免大肠杆菌的干扰 染色质的支架蛋白是非组蛋白吗?我怎么觉得是核纤层蛋白我的意思是说染色质的支架蛋白,不是结合蛋白。 超声法破碎细胞提蛋白质的具体步骤听说用超声破碎的方法提取蛋白质能节省很多蛋白,但是我一直比较困惑,用超声法提取蛋白不加蛋白裂解液了?至少我问的那个人他没有加,这个到底