使用透射电镜观察细胞核仁,取材时应注意哪些问题?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/22 04:21:32
使用透射电镜观察细胞核仁,取材时应注意哪些问题?
使用透射电镜观察细胞核仁,取材时应注意哪些问题?
使用透射电镜观察细胞核仁,取材时应注意哪些问题?
织从生物活体取下以后,如果不立即进行适当处理,会由于细胞内部各种酶的作用,出现细胞自溶现象.此外,还可能由于污染,微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏.因此,为了使细胞结构尽可能保持生前状态,必须做到快、小、准、冷：
(1)．动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投入2.5%戊二醛固定液.
(2)．所取组织的体积要小,一般不超过1mm×1mm×1mm.也可将组织修成1mm×1mm×2mm大小长条形.因为固定剂的渗透能力较弱,组织块如果太大,块的内部将不能得到良好的固定.
(3)．机械损伤要小,解剖器械应锋利,操作宜轻,避免牵拉、挫伤与挤压.
(4)．操作最好在低温(0℃～4℃)下进行,以降低酶的活性,防止细胞自溶.
(5)．取材部位要准确.
取材方法：将取出的组织放在洁净的蜡版上,滴一滴预冷的固定液,用两片新的、锋利的刀片成“拉锯式”将组织切下并修小,然后用牙签或镊子将组织块移至盛有冷的固定液的小瓶中.如果组织带有较多的血液和组织液,应先用固定液洗几遍,然后再切成小块固定.
①快速： 为了保持生物材料的活体状态,减少“死后”超微结构变化,样品离体后应在1分钟内浸入预冷固定液中.
②块小： 组织块体积一般在0.5-1mm3.由于固定液渗透速率缓慢,渗透深度较浅,若组织块过大,样品中心部位将得不到良好固定.对于较难一次性取的较小的组织,可适当取大一点的组织,先投入预冷的4%多聚甲醛中固定30min,随后取出切成小块,放入戊二醛固定液中继续低温固定.
③部位准： 肾脏、胰岛、脑垂体等不同部位有不同组织结构,应根据研究目的和要求确定切取部位.为了电镜观察的准确性,取材部位必须要准确,而且,不同实验组的标本尽量取在相同部位（如心肌组织取左心室,则一律取左心室）,否则,将无法比较,进而影响观察结果,最终导致电镜观察失败.
④损伤小： 取材用器械应锋利,取材时应避免牵拉、挤压,防止组织受机械损伤.
⑤低温： 为了抑制酶的活性,减少组织自溶,取材最好在低温条件下进行.取下样品所浸泡的固定液也要保持在0～4℃,组织块修切时要在冷固定液中进行.