Western杂交中,为何要引入二抗?为何不在一抗上直接加上放射性同位素或者GFP?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/27 23:12:54
Western杂交中,为何要引入二抗?为何不在一抗上直接加上放射性同位素或者GFP?
Western杂交中,为何要引入二抗?为何不在一抗上直接加上放射性同位素或者GFP?
Western杂交中,为何要引入二抗?为何不在一抗上直接加上放射性同位素或者GFP?
原因有以下几点：
1. 一抗识别抗原的数量有限,假设一分子的抗体识别一分子的抗原,而一分子抗原上只有3-6个分子的标记的话,最后只能检测到3-6个标记分子.但是如果使用二抗,一分子一抗可以被多个（n个）二抗识别,这个时候每个二抗上带有3-6个标记分子的话,信号就会放大n倍.另外,一抗如果使用单克隆抗体,只能识别抗原的单一表位,而二抗基本上都是多克隆抗体,所以一个一抗体上可以结合很多个二抗.这是使用二抗最基本的原因,多个二抗用来识别一抗,提高检测灵敏度.
2.任何对一抗进行的标记或者修饰,都有可能造成一抗识别抗原能力的下降.实际上更多的二抗是用HRP或者AP来标记的（当然荧光染料的标记也是很重要的一种）,但是这些酶或染料标记到抗体上后,采用的方法并不能选择标记在抗体的哪个位置,也就是说,标记物越多,有可能对抗原识别位点造成的影响也就越大,从而引起抗体识别抗原能力下降,也会降低检测的灵敏度.
3.一抗价格昂贵,如果对每一个一抗都进行标记,将是一笔很大的花费,因为一抗都是抗原特异的,但是二抗不一样,二抗可以识别同一物种来源的一抗,成本相对低廉.
另外,同位素现在在WB基本没有人用了,同位素半衰期只有14还是15天,就是标记了,半个月标记就没了,不好保存,而且同位素对实验室有要求的.
敏感性差，一般用间接法，就是一二抗
你只用一抗你检测的最低的靶蛋白是1ng的话，如果你一抗和二抗都用的话，检测最低的靶蛋白0.01ng，具体放大多少倍没研究过，但是至少是100倍以上把回答详细点，谢谢了，这是研究生面试的一道题。那不好意思啦，我只知道这个深度...
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敏感性差，一般用间接法，就是一二抗
你只用一抗你检测的最低的靶蛋白是1ng的话，如果你一抗和二抗都用的话，检测最低的靶蛋白0.01ng，具体放大多少倍没研究过，但是至少是100倍以上把
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