杂种细胞到杂交植株过程,植株杂交的技术路线是什么样的?RT,融合的杂交细胞,怎么培养成杂交植株.介绍下中间的技术路线,是要和和植物细胞工程相关的.

杂种细胞到杂交植株过程,植株杂交的技术路线是什么样的?RT,融合的杂交细胞,怎么培养成杂交植株.介绍下中间的技术路线,是要和和植物细胞工程相关的.
杂种细胞到杂交植株过程,植株杂交的技术路线是什么样的?
RT,融合的杂交细胞,怎么培养成杂交植株.
介绍下中间的技术路线,是要和和植物细胞工程相关的.

杂种细胞到杂交植株过程,植株杂交的技术路线是什么样的?RT,融合的杂交细胞,怎么培养成杂交植株.介绍下中间的技术路线,是要和和植物细胞工程相关的.
植物细胞融合后,要在黑暗下培养几天,再生出细胞壁；接着培养几天细胞会膨大,进行分裂,在显微镜下可看到1次、2次.多次分裂的细胞,根据材料的不同,形成肉眼可见的多细胞团大概需要半个月到几个月的时间.细胞继续分裂,会形成肉眼可见得的多细胞团,这时可将其挑出,在固液双层中继续培养形成小愈伤；然后,将小愈伤挑出至增殖培养基上增殖,此时愈伤会进一步长大；当愈伤长得一定大小时,将其挑至分化培养基上,此过程时间一般很长3—7或8个月不等,需要不停的更换培养基至到出苗,当苗长到一定大小时将苗剪到（或用切的）生根培养集中,再然后就是鉴定是不是杂种植株了.
总之,做细胞融合还是很辛苦的,因为周期实在是太长了...
希望你做得顺利吧!

植物组织培养 脱分化 再分化 形成愈伤组织 再转移到大田培养成杂种植株

培养过程：
离体的植物组织、器官或细胞 愈伤组织 根、芽（胚状体）→ 植物体
2. 脱分化和再分化比较
比较内容 脱分化 再分化
过程 细胞→愈伤组织 愈伤组织→幼苗
形成体特点 排列疏松，高度液泡，
化无定型的薄壁细胞 ...

全部展开

培养过程：
离体的植物组织、器官或细胞 愈伤组织 根、芽（胚状体）→ 植物体
2. 脱分化和再分化比较
比较内容 脱分化 再分化
过程 细胞→愈伤组织 愈伤组织→幼苗
形成体特点 排列疏松，高度液泡，
化无定型的薄壁细胞 有根、芽（胚状体）
需要条件 离体 离体
适宜营养 适宜营养
植物激素（生长素、细胞分裂素） 植物激素（生长素、细胞分裂素） 光照
影响因素 当细胞分裂素与生长素共同使用时，能强烈地促进愈伤组织的形成， 两者不同浓度的配比在再分化过程中，分别对诱导根或芽的产生起关键作用。当细胞分裂素与生长素的浓度比高时，有利于芽的产生；浓度比低时，有利于根的产生。
（三）植物体细胞杂交
1、技术基础：植物组织培养
2、原理：细胞膜的流动性、细胞的全能性
3、过程：

4、优点：克服远缘（源）杂交不亲和的障碍，大大扩展可用于杂交的亲本组合范围。

收起

构建Ti质粒载体：设计载体，确定酶切位点、标记基因和启动子等，设计引物并通过RT-PCR克隆目的基因，载体和目的基因的酶切，连接。
准备供转染的原生质体：通过纤维素酶，果胶酶，半纤维素酶分离原生质体，通过离心或者过滤进行纯化，然后可以进行浅层培养培养原生质体。
农杆菌介导的遗传转化：共培养。
根据标记基因或者遗传缺陷筛选转化成功的细胞，培养。
原生质体再生细胞壁，分...

全部展开

构建Ti质粒载体：设计载体，确定酶切位点、标记基因和启动子等，设计引物并通过RT-PCR克隆目的基因，载体和目的基因的酶切，连接。
准备供转染的原生质体：通过纤维素酶，果胶酶，半纤维素酶分离原生质体，通过离心或者过滤进行纯化，然后可以进行浅层培养培养原生质体。
农杆菌介导的遗传转化：共培养。
根据标记基因或者遗传缺陷筛选转化成功的细胞，培养。
原生质体再生细胞壁，分裂，形成愈伤组织。
诱导形态发生：改变激素组成和浓度。增加细胞分裂素，降低生长素，诱导不定芽的形成。
中间繁殖体的增殖：降低细胞分裂素的含量，提高光照强度，降低湿度，减少玻璃化苗的产生。
壮苗生根：降低无机盐浓度，碳源减少，生长素诱导生根。
试管苗移栽：炼苗，防菌。

收起