土壤含硒量如何检验?请求可实际操作解答.我需要测量土壤的含硒量.

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1．1 仪器
1．岛津UV一120型紫外一可见分光光度计；2．XW一80型旋涡混合器；3．FZ一2恒温振荡
器；4．岛津TB-85型恒温水浴槽
l_2 试剂
1．0．1 DDB溶液：称取0．1 g DDB 溶于100 m1 1 mol／L HCI中.
2．硒标准溶液：称取高纯SeO：1 40．5 mg,溶于1 mo|／L HCI中．定容至l00ml,其浓度
为1．00 mg／L.4℃贮存,用时稀释.
3．混合酸：优级纯硫酸、高氯酸以3：4(v／v)配制,分解样品用.
所用水为一次石英蒸馏器重蒸去离子水．电导率< l×lO cm
1．3 一般操作步骤
1．3．1 土壤垒硒量的测定称取1 g左右的土样于1 O0mJ消煮管中.加入混合酸7m1．5
NaMoO一1 ml,加水3 ml,油浴加热消煮.控温在180 C,消煮至残渣变白为止.冷后,加水稀释
至20～30 mJ,振摇．过滤于50ml容量瓶中 在滤液中加入磷酸3m1．1 mol／L草酸3 ml和
l0 盐酸羟胺3ml,摇匀.50C水浴1 0rain 然后,再加入0．1 DDB 2ml,50℃水浴30rain.
冷后加入4 ml正己烷.振摇l rain,取有机相以正己烷为参比,于335 nm波长处测量其吸光
度.
I．3．2 土壤中各形态硒的测定 .]
硒的分级方法为：
(I)可溶态(Ft)：0．2 mol／L K—SO ,pH6．6提取.
(2)交换态(F!)：0．1 mol／L K bIPO‘ pH6．6提取
(3)氨水提取态( )：0．05 mo|／L NH3·H 2O提取.
(4)盐酸提取态( )：6 mol／L HCI提取.
(5)残留态( ) 、
称取5 g过20目筛的土样,放入50mI离心管中．按水土比(5；1)依次加入各提取剂连
续提取 在室温(25C)下,依次振荡16 h,24 h.16 h,16 h,然后在高速离心机上离心(I 200
g)8 min．收集上清液,再用5 ml水洗一次．洗液离心后台并在一起,加入混酸4～7 m1．5
NaMoO4 1 ml,油浴消化 用分光光度法测定.
DDB由奉宴验室合成,成品经薄层层析、紫外、红外和元煮分析．纯度属高纯试剂级.
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· 90· 南京农业大学学报 lB卷
2 结果和讨论
2．1 最佳测试条件的选择
2．1．1 测量波长的选择4,6一二溴苤硒脑在正己烷溶剂中,以uv一120型分光光度计扫描
22O～400 nm,其吸光光谱曲线如图1所示,发现最大吸收峰位于渡长335 nm处(以正己烷
为参比,比槽厚度1 cm).
2．1．2 介质及酸度 试验选用盐酸为介质,当盐酸酸度为0．8～5 mol／L时,吸光度Am值
基本不变(图2)
(se：1 5 uE／mI)
图l 正己烷中Se-DDB的吸收光谱
Fig．1 S* c‘ra Se—DDB complex
2．1．3 显色剂的选择和用量经试验,2,
3一二氨基萘(DAN),3,3,一二氨基联苯胺
(DAB),4一氨邻苯二胺,4一硝基邻苯二胺和0
DDB五种显色剂,前四种有的需要将消化液 0
的pH值调到特定酸度,否则显色反应受阻, ：,
有的与硒形成络合物的萃取率低.DDB与硒
反应不需要调节消化液酸度,其Se—DDB络
合物可被正己烷完全萃取,萃取率大于
99 故选用DDB为络合剂.在20～30 ml V／ml
消化液中(酸度约1 mol／L)加入0．5 DDB
溶液1 ml即可反应完全(图3). (s ：2 pg／m1)
2．1．4 显色反应的温度和时间 在室温下 图3 显色剂DDB的用量
络合反应至少需要170 min才能反应完全, Fig．3 Effect the~,IOuI Lt of developer
而用50C水浴,在30 min即可反应完全(图d).
2．1．5 反应的稳定性将4,6一二溴苤硒脑的正己烷溶液在密闭溶器中放置120 mln,吸光
度值Am无显著变化(图5)
2．1．6 干扰的消除—— 掩蔽剂选择对土样消化液采用H sPO·+H C O·+NH OH·HC1代
替EDTA+NH OH·HCI,掩蔽干扰所测结果满意(表1)
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l期 周溶等： 以3,5-二溴穹fI苯二胺为显色剂用分光光度法测定土壤中微量硒 ·9l·
《
0j．一3
圈4 显色反应与时阃和温度的关系
Fig．4 Relatiooship betw~n developing time and mD目 “-
2．2 方法的精密度和准确度
2．2．1 用紫外分光光度法测定土壤标准参
考物GSS一6的结果从表2可见,GSS一6标
准土壤样品测定结果的标准差为0．01 4,变
异系数为1．12 ,所得结果与标准值接近.
2．2 2 工作曲线绘制工作曲线所依据的
两个变量的线性如何,决定着工作蛆线的质
量,进一步影响所得结果的准确度.硒含量与
吸光度的关系见表3.从表3可得硒工作溶
液的浓度与吸光度的回归方程： 一0．2z
一3．4×10_ r：0．996,可见工作曲线线性
关系良好.
0
0
《0
．o
图5 稳定性试验
Fig．S S~lbll[ty of the reaction
表1 不同掩蔽剂消除干扰的结果
Table 1 Efect ofmu kt~g_掣啦乜
土壤标准样品GSS-6舍硒量为1．3{±0．1 pg／g
The se~ontcm of 5hu'dafd soil samp~G 一6 is I．34士0．1 ／g