关于植物原生质体提取,请做过这方面实验的高手指教~我用培养7天的黄瓜子叶提取原生质体,但实验多次都不成功.酶液成分：1%纤维素酶,1%果胶酶,0.7M甘露醇,0.7mM磷酸二氢钾,10mM二水合氯化钙,P
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 18:11:56
关于植物原生质体提取,请做过这方面实验的高手指教~我用培养7天的黄瓜子叶提取原生质体,但实验多次都不成功.酶液成分：1%纤维素酶,1%果胶酶,0.7M甘露醇,0.7mM磷酸二氢钾,10mM二水合氯化钙,P
关于植物原生质体提取,请做过这方面实验的高手指教~
我用培养7天的黄瓜子叶提取原生质体,但实验多次都不成功.酶液成分：1%纤维素酶,1%果胶酶,0.7M甘露醇,0.7mM磷酸二氢钾,10mM二水合氯化钙,PH6.取3~4片子叶,剪碎后,加1ml酶液,25度,50rpm,酶解4h（甚至更长时间）.叶子基本没有什么变化,酶液也很澄清；取少量在显微镜下观察也看不到细胞形态的东西.
自己分析有一下几个问题：
（1）我用的是黄化苗,
（2）我就像配一般试剂一样,按剂量称取,然后溶解定容的.酶液配置过程中有没有什么特别要求?甘露醇浓度是不是太高?
（3）子叶需要撕去下表皮吗?是不是不能用剪的,而要用解剖刀切,还要按一定方向?
（4）显微镜下看不到细胞会不会是因为黄化苗中没有叶绿体不好辨认?
也或者是其他什么原因,请大家帮我分析分析,给些建议~感激不尽!
关于植物原生质体提取,请做过这方面实验的高手指教~我用培养7天的黄瓜子叶提取原生质体,但实验多次都不成功.酶液成分：1%纤维素酶,1%果胶酶,0.7M甘露醇,0.7mM磷酸二氢钾,10mM二水合氯化钙,P
1 黄化苗对有的植物来说只会更有利做原生质体,比如玉米.
2 酶液均要过0.45的膜, 过滤灭菌.
3 老的方法要撕下表皮,现在常用手术刀片切,要极细的长条.
4 不会,黄化苗的原生质体在显微镜下会成浅浅的黄色,还是能分辨出来的.
你所描述的情况有可能的原因：1 酶失活.2 叶子切得不够细,起码要1mm.3 我觉得你调的渗透压有点高,一般植物0.5-0.6
给你个网址 哈佛大学 Professor shen 的lab, 做原生质体最牛的人,上面有视屏和Protocol, 希望对你有用.（一般做原生质体都是先从拟南芥开始,先练练手,在此基础上建立感兴趣植物的protocol）
http://genetics.mgh.harvard.edu/sheenweb/protocols_reg.html
fdg
这个，要做多组对照，比如要看看酶什么的是否失活了，是否有问题，像你自己说的，用的黄化苗，是有可能有影响的，所以你可以换成其他的。酶的配制过程中注意不要失活，也许酶失活了，或者反应条件不合适，所以没法反应，对，好像是要用解剖刀的，我不是太清楚。不会，真正提出原生质体，很容易辨认的，我们曾经做过，只不过是用的化学的方法...
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这个，要做多组对照，比如要看看酶什么的是否失活了，是否有问题，像你自己说的，用的黄化苗，是有可能有影响的，所以你可以换成其他的。酶的配制过程中注意不要失活，也许酶失活了，或者反应条件不合适，所以没法反应，对，好像是要用解剖刀的，我不是太清楚。不会，真正提出原生质体，很容易辨认的，我们曾经做过，只不过是用的化学的方法
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