关于一段NCBI上没有的基因序列该基因在NCBI上没有登录,但是同目物种的该基因有.通过基因的电子克隆未果.通过同目物种的该基因的同源性分析,用同源性高的序列与该物种的EST库进行比较,无

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/24 00:15:28
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关于一段NCBI上没有的基因序列
该基因在NCBI上没有登录,但是同目物种的该基因有.
通过基因的电子克隆未果.
通过同目物种的该基因的同源性分析,用同源性高的序列与该物种的EST库进行比较,无结果.
如果我现在想要克隆出该基因应该怎么办?

关于一段NCBI上没有的基因序列该基因在NCBI上没有登录,但是同目物种的该基因有.通过基因的电子克隆未果.通过同目物种的该基因的同源性分析,用同源性高的序列与该物种的EST库进行比较,无
提取该物质总RNA做反转录
获得cDNA后合成双链
根据同源物种的该基因序列设计引物(简并引物)
PCR扩增得到目的片段(可能会用到巢式PCR增加特异性)
切胶回收纯化
质粒载体连接转染
筛选获得重组子测序
得基因序列后根据此序列再次设计引物
做3’和5’RACE
再次测序确认得到全长基因
利用拟南芥突变体做该基因的功能分析
这是我一同学做的博士论文实验过程
做的是某一树种的基因同源克隆

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