连接酶主要在哪生有
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 17:14:29
连接酶主要在哪生有
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连接酶主要在哪生有
连接酶就是将两段核酸连接起来的酶,相当于基因工程中的“糨糊”.现已发现几种不同来源或作用于不同底物的连接酶.
1．T4 DNA 连接酶
T4 DNA连接酶的分子量为68kDa,催化DNA5'磷酸基与3'羟基之间形成磷酸二酯键.反应底物为粘端、切口、平端的RNA（但效率低）或DNA.低浓度的聚乙二醇PEG（一般为10%）和单价阳离子（150-200mM NaCl）可以提高平端连接速率.
一般采用Weiss单位来衡量T4 DNA连接酶的活性.在37℃下20分钟催化1 nmol 32p从焦磷酸根置换到[γ,β32P]ATP所需的酶量,定义为1个Weiss单位.该定义方法基于ATP和焦磷酸的交换,是最常用的连接酶单位,但该定义所展示的直观生物学意义不显著.New England Biolabs公司也提出了一种定义方式,通过粘性末端的连接效率来表示.即,在20μl反应体系中于16℃,使HindⅢ切过的 DNA（300μg/ml,0.12μM 5' 末端）在30分钟内连接50%所需的酶量为1个NEB单位.1个NEB单位等于0.015 Weiss单位,1 Weiss 单位等于 67 NEB单位.连接反应条件需要ATP,若在16℃反应,大约需4小时；若在4℃反应,则需反应过夜.
2．E.coli DNA 连接酶
与T4 DNA ligase活性相似,但需烟酰胺-腺嘌呤二核苷酸（NAD+）参与,且其平端连接效率低,常用于置换合成法合成cDNA.作cDNA克隆时,不会将RNA连接到DNA,不连接RNA.可用于Okayama and Berg法克隆cDNA.
3．Taq DNA 连接酶
Taq DNA连接酶可在两个寡核苷酸之间进行连接反应,同时必须与另一DNA链形成杂交体,相当于连接dsDNA中的缺口,作用在45℃～65℃,需NAD+.可用于检测等位基因的变化以及在PCR扩增中引入寡核苷酸.它不可替代T4 DNA ligase.
4．T4 RNA连接酶
T4 RNA连接酶可以催化单链DNA或RNA的5'-磷酸与另一单链DNA或RNA的3'羟基之间形成共价连接.在单链DNA或单链RNA的5'端磷酸基团加上可连接带3'羟基的DNA或RNA或单核苷酸pNp,因此T4 RNA 连接酶可用于标记RNA的3'末端、单链DNA或RNA的连接、增强T4 DNA连接酶的连接活性以及合成寡核苷酸.
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