怎么用液氮提土壤DNA 谢了!酶切时有什么酶？

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/11/25 15:47:47

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酶切时有什么酶？

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称取1 g 土壤,放入研钵中,倒入适量的液氮,立即研磨;再倒入适量的液氮,研磨,重复3 次,使土壤颗粒研成粉末; 将13.5 ml 提取缓冲液(0.1 mol/l磷酸盐[ph = 8.0 ] ,0.1 mol/l edta [ph 8.0 ] ,0.1 mol/l tris-hcl [ph 8.0 ] ,1.5 mol/l nacl ,1.0 % ctab) 和50μl蛋白酶k(10 g/l ) 与5 g 土壤置于50 ml 的离心管中,放入37 ℃恒温摇床上,225 r　min - 1振荡30 min ；加入1.5 ml20 % sds ,轻轻混匀,65 ℃水浴加热2 h ,每隔15～30 min 轻轻摇匀1 次;5 000 r　min - 1离心10 min ,将上清液转入新的50 ml 离心管中;取4.5 ml 提取缓冲液加入原离心管,摇匀泥浆,加入0.5 ml 20 % sds ,65 ℃水浴15 min ,用上述同样的离心速度离心10 min ,将上清液与原上清液合并;再重复此步骤1 次；用与上清液等量的三氯甲烷于离心管中混匀,5000 r　min - 1离心20 min ;收集上清液,并加入0.6 倍体积的异丙醇,室温静置1 h ;25 ℃下12 000 r　min - 1离心20 min ,倒出上清液,干燥后加入500μl 去离子水,溶解粘附于离心管壁的dna 及其杂质,并收集于1.5 ml 的微型离心管中.
酶切时用限制性核酸内切酶.

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