请问什么是bisulfite sequencing PCR,BSP?BSP和MSP是什么关系,做MSP之前必须要先做BSP吗?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/07 18:42:54
请问什么是bisulfite sequencing PCR,BSP?BSP和MSP是什么关系,做MSP之前必须要先做BSP吗?
请问什么是bisulfite sequencing PCR,BSP?
BSP和MSP是什么关系,做MSP之前必须要先做BSP吗?
请问什么是bisulfite sequencing PCR,BSP?BSP和MSP是什么关系,做MSP之前必须要先做BSP吗?
目前,基因的甲基化研究主要结合亚硫酸氢钠处理和PCR技术,分为甲基化特异性PCR（Methylation specific PCR,MSP）和硫化测序PCR（Bisulfite sequencing PCR,BSP）.
技术原理：
DNA经亚硫酸氢盐硫化处理后,DNA双链中的“C”转化为“U”,通过随后的PCR,将“U”转化为“T”,但亚硫酸氢盐不能使已发生了甲基化的DNA的“C”发生上述转化,因此,根据经亚硫酸氢盐处理的DNA模板设计引物时,先输入感兴趣的DNA序列,程序将会显示2种序列:一种是输入的源DNA序列;另一种是硫化处理后的DNA序列,除了CpG岛上的5甲基胞嘧啶(5mC)之外,所有非甲基化的“C”都转换成了“T”,根据转化后的序列设计引物,进行BSP和MSP.
1.MSP：DNA经亚硫酸氢钠处理后,所有未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶无此改变.DNA的甲基化差异转变为序列差异,设计两对分别针对甲基化与非甲基化等位基因的引物,结合PCR扩增就可以将甲基化与非甲基化等位基因区分开.这种方法灵敏度高,对DNA的质和量需要少.
2.BSP：甲基化的胞嘧啶在亚硫酸氢钠发生脱氨基后不会转变,用一对特异性引物扩增后测序,再与DNA原始序列比对确定甲基化位点.测序法克服了只能针对单个位点检测,并且这些位点必须是限制性内切酶识别位点的缺点,可以对任何基因序列的甲基化状态进行检测.