请问:怎样分离提纯微生物?请问:用显微镜观查微生物,因菌体是被染色的,但染色后的菌体是死的,如要分离活的纯一品种的微生物需怎样进行?请通俗、详细些的给予赐教.
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/18 22:54:48
请问:怎样分离提纯微生物?请问:用显微镜观查微生物,因菌体是被染色的,但染色后的菌体是死的,如要分离活的纯一品种的微生物需怎样进行?请通俗、详细些的给予赐教.
请问:怎样分离提纯微生物?
请问:用显微镜观查微生物,因菌体是被染色的,但染色后的菌体是死的,如要分离活的纯一品种的微生物需怎样进行?请通俗、详细些的给予赐教.
请问:怎样分离提纯微生物?请问:用显微镜观查微生物,因菌体是被染色的,但染色后的菌体是死的,如要分离活的纯一品种的微生物需怎样进行?请通俗、详细些的给予赐教.
1.稀释涂布平板法
(1) 倒平板 将肉膏蛋白胨琼脂培养基,高氏Ⅰ号琼脂培养基;马丁氏琼脂培养基加热溶化,待冷至55~60℃,高氏Ⅰ号琼脂培养基加入10%酚数滴,马丁氏琼脂培养基加入链霉素溶液.混匀后分别倒平板,每种培养基倒三皿;
(2) 制备土壤稀释溶液 称取土样10g,放入盛有90ml无菌水并带入玻璃珠的三角烧瓶,振动约20min,使土样与水分混合,将细胞分散.用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一个盛有9ml无菌水的试管中,混合均匀,以此推制成10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释的土壤溶液;
(3) 涂布 将上述每种培养基的三个平板地面分别用记号笔写上10-4,10-5,10-6三种稀释度,然后用无菌吸管分别由10-4,10-5,10-6三管土壤稀释液中各取0.1ml对号放入已写好室温下静置5~10min,使菌液吸附进培养基;
(4) 培养 将高氏Ⅰ号琼脂培养基平板;马丁氏琼脂培养基平板倒置于28℃温室中培养3~5day,肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2~3day;
(5) 挑菌落 将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到上述三种培养基的斜面上,分别置28℃和37℃温室培养,大菌苔长出后,检查其特征是否一致,同时将细胞涂片染色后用显微镜检查是为单一的微生物.若发现有杂菌,需要再一次进行分离、纯化,直到获得纯培养.
2.平板划线分离法
(1)倒平板 按稀释涂布平板倒平板,并用记号标明培养基名称,土样编号和实验日期;
(2) 划线 在近火焰处,左手拿皿底,右手拿接种环,挑取上述的土壤悬液一环在平板上划线.划线的方法很多,但无论采用那种方法,其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释,使之形成单个菌落;
(3) 挑菌落 同稀释涂布平板法,一直到分离的微生物认为纯化为止.
做一个平板培养基 安无菌操作法 挑取少量的微生物 划线培养
首先确定这种微生物需要的营养物质是什么,配制相应的培养基,然后将菌液稀释,涂在培养基平板上,稀释度大概保证每一个细菌都在培养基上分离,经过一段时间的培养,单个细菌长出菌落,然后挑取菌落,显微镜镜检。
一般大学里的微生物实验书里面都有微生物提纯的操作,譬如从土壤里分离并且纯化微生物,可以分离出单一的菌体,完成这项操作需要基本的微生物实验技能。
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第一个回答其实就差不多,但是我想他答的并不具备普遍性,而只是教科书上关于“土壤中微生物的分离”的相关资料。
这不要紧,我来补充补充。首先你要分析你的原始样品的环境特性,确定培养基,比如海里的样品就要用含盐比较高的培养基例如DIFCO 2166,而盐碱土里采集的样品就应该把pH调到碱性。另外要注意原始样品到底是富营养还是寡营养,比如湖水就是寡营养环境,从这样的样品中分离微生物就应该选择营养物...
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第一个回答其实就差不多,但是我想他答的并不具备普遍性,而只是教科书上关于“土壤中微生物的分离”的相关资料。
这不要紧,我来补充补充。首先你要分析你的原始样品的环境特性,确定培养基,比如海里的样品就要用含盐比较高的培养基例如DIFCO 2166,而盐碱土里采集的样品就应该把pH调到碱性。另外要注意原始样品到底是富营养还是寡营养,比如湖水就是寡营养环境,从这样的样品中分离微生物就应该选择营养物质浓度较低的培养基。再就是尽量模仿原始样品的温度,比如从低温环境下采集的样品就应该进行较低温度的培养,而从温泉之类的地方采集的样品就应该进行高温培养。诸如此类,不一而足,反正就是尽量模仿微生物在自然界的生存条件,这样才能在实验室培养出尽量丰富的微生物品种来。事实上到目前为止真正能在实验室培养出来的微生物品种只占环境中所有物种的1%不到,这是题外话了。
另外,步骤一般就是:选择合适的稀释度,先进行涂布分离,然后挑取你感兴趣的单菌落进行划线分离。
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