怎样从泡菜中分离乳酸菌?实验方案,最好有实验原理和步骤!

怎样从泡菜中分离乳酸菌?实验方案,最好有实验原理和步骤!
怎样从泡菜中分离乳酸菌?
实验方案,最好有实验原理和步骤!

怎样从泡菜中分离乳酸菌?实验方案,最好有实验原理和步骤!
我也在做这个,下面是我整理的,时间关系只能这样了,可以看看.都要求无菌操作
　　菌种的分离 取lmL卤汁以10倍递增稀释方法（一份泡菜汁,九份无菌水,再取一份第一只管中溶液,加九份无菌水,依次类推）,将其稀释至1/10～10的-10次幂（我打不上去）,然后从不同浓度稀
　　释液中分别取lmL倾注在平皿中,再倒入培养基相混合,待培养基凝固后倒置于30~C恒温下
　　培养48h.挑取长势良好的单个茵落划线分纯,直至纯化(茵落单个大小一致,革兰氏染色镜
　　检,茵体一致).结果分离得到3株不同菌株,分别编号为菌株1、菌株2、菌株3.再分别转移
　　到试管斜面上进行保存.
　　分离用培养基：牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,蒸馏水1 000 mL,琼脂20g,pH7．0—7．2
　　；保存用斜面培养基：酵母膏1％ ,碳酸钙2％ ,葡萄糖1％ ,琼脂2％ ,pH 7．0.
　　培养条件
　　将分离出的菌株1、菌株2、菌株3分别接种在上述4种不同的培养基上,
　　在30.【=恒温条件下培养48h后观察并测定其培养结果.
　　测定方法 菌落总数采用逐级稀释法来计数；pH值用pHS一2C酸度计测定；乳酸定性
　　及含量测定依据食品检验技术
　　1I．2．1乳酸菌的分离与筛选的试验程序 自然发酵酸菜汁液一稀释一培养一挑起单菌落染色、镜检一挑
　　选革兰氏阳性球菌单菌落一Ⅲ号培养基一挑选溶钙圈大的球菌反复在Ⅲ号培养基上几次纯化筛选一单菌落优
　　良菌株一试管穿刺低温保存.
　　1．2 1．2 乳酸菌的鉴定 用光学显微镜、放大镜进行乳酸菌的形态特征鉴定.生理生化特征鉴定：产乳
　　酸定性试验——乳酸纸层析法0- 、过氧化氢酶(接触酶)反应⋯、明胶水解反应 、硫化氢反应 、乳酸菌
　　发酵营养型试验0 、耐盐、酸、温度试验.
　　1．2．I．3 乳酸菌的保存⋯ 采用定期移植低温保藏法.培养基配方：葡萄糖1％ 、蛋白胨0 2％ 、
　　l(}l2PQ|0．2％、琼脂20％、pH值7 0,分装试管,121.c灭菌30min.将使用对数生长期后期的细胞进行穿刺
　　培养,然后密封存于冰箱玲藏室内(5qc左右),2个月移植1次.
　　1．2．2 分离乳酸菌的生理特点试验
　　1 2 2．1 最适生长温度的测定OD值以同温下不接种培养基作对照,定期取出接种培养基在721分光光度
　　计上,用最大吸收光波长 =6001RIifl测定.
　　1．2．2．2 生长周期的测定oD值(方法同上)；pH值：PHB一4pH计；可滴定酸(以乳酸计)：吸取ImL菌液
　　加入9Ⅱ1L蒸馏水,加入1～2滴酚酞,用0．1NNaOH滴定.
　　1．2 2．3 最适pH值的测试、最适盐浓度的测试.
　　供试样品及培养基
　　分离用样品：泡菜汁、酸奶及西红柿均为市售
　　分离用培养基：①BCP培养基：酵母膏2 5g,蛋白胨5g,葡萄糖5g,溴甲酚紫0 04g,琼脂15g,
　　蒸槽水lO00ml,pH7 0；②MRS培养基见文献 .
　　菌种保藏用培养基：脱脂乳培养基：新鲜牛乳离心去掉上层乳脂,下层奶液分装试管,105℃
　　灭菌20mln.
　　菌利 鉴定用培养基见文献 6.
　　1 2 方法
　　1 2 1 乳酸菌的分离纯化 取泡菜汁、酸奶、西红柿表面洗液进行梯度稀释,分别用倾注法、涂布
　　法和划线法在BCP和MRS培养基平板上进行菌种分离.挑取在BCP平板上有透明目的菌落,在
　　MRS平扳上有溶钙圈的菌落,反复纯化至纯种,挑菌至脱脂牛奶试管中保存
　　1．2 2 乳酸菌复筛对初筛菌株进行革兰氏染色,保留革兰氏阳性菌株．并对其所产乳酸能力进
　　行定性、定量分析,筛选出产酸高的菌株保存,再把产酸高的菌株经萝l、汁发酵 】,进一步选择产
　　酸高、_l】味纯正的菌株保存鉴定
　　1 2 3 乳酸定性测定果用纸层析法.溶剂系统为乙醇：浓氨水：水=80：5：15,显色剂为0 04％
　　的溴甲酚紫酒精溶液.层析时将乳酸、柠檬酸配成1％ 的标准溶液,两种标准溶液 及乳酸发酵液
　　均点样3 ．上行层析,显色与标准样比较
　　1．2 4 乳酸的定量测定采用气相色谱法,利用苄酯化法制备乳酸衍生物,将待测乳酸菌株在产
　　酸培养基内37"C培养3d,离心.取上清液剃备衍生物,气相色谱分析含量.气相色谱工作条件为：
　　EGS色谱柱,柱温160'C,气化温度180'17．,检测器温度l70"C,载气为N,.
　　1．2 5 菌种鉴定根据《简明第八版伯杰细菌鉴定手册》 和《一般细菌常用鉴定手册》[6 对复筛
　　出的菌株的形态、生理生化、碳源利用等方面进行系统鉴定,并提取乳酸菌株DNA,采用熔链温度
　　法捌G+C％含量 J.