请问western blot点样第一次做垂直式蛋白质电泳,在点样孔里点样,枪放在两玻璃板之间,向点样孔点样时为什么有时蛋白样流到旁边的点样孔,有时还漏到玻璃板后面?哪里出错了?写错了，是枪头
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2025/02/06 11:22:36
请问western blot点样第一次做垂直式蛋白质电泳,在点样孔里点样,枪放在两玻璃板之间,向点样孔点样时为什么有时蛋白样流到旁边的点样孔,有时还漏到玻璃板后面?哪里出错了?写错了，是枪头
请问western blot点样
第一次做垂直式蛋白质电泳,在点样孔里点样,枪放在两玻璃板之间,向点样孔点样时为什么有时蛋白样流到旁边的点样孔,有时还漏到玻璃板后面?哪里出错了?
写错了，是枪头放在两玻璃板之间。
请问western blot点样第一次做垂直式蛋白质电泳,在点样孔里点样,枪放在两玻璃板之间,向点样孔点样时为什么有时蛋白样流到旁边的点样孔,有时还漏到玻璃板后面?哪里出错了?写错了，是枪头
一般应该不会出现这种情况啊,我也是才开始做,从没有遇到这种情况.
我个人感觉可能有以下几点您需要检查一下：
1.制胶有没有问题?浓缩胶制的时候要求加了TEMED之后要尽快加入制胶板中,而且下层分离胶之上应该有其他溶液,必须双蒸水洗净、吸水纸吸干后再加浓缩胶,还有就是不能有气泡；
2.加样有没有问题?我们用的是专门的加样针,不是用的枪,不过应该也差不太多吧,可能针比枪更容易避免气泡和加样速度太快造成的样品溢出,还有一点就是针头/枪头一定要在直视下看着伸到加样孔底部才能缓慢加样,加样过程中针头/枪头最好不要随着样品液面的升高而升高,要保持在底部（不能戳到胶哈）,这样可以让样品更浓集一点；
3.玻板有没有问题?但玻板有问题一般不会出现这种情况,一般会出现漏胶严重或裂胶,裂胶的具体原因我也不清楚；
综上,建议你
试一试让别人制胶,你再来加样,或者你制胶,别人加样,看行不行?这样找一找大致的原因后,再细查具体原因.
你的枪头没有插到梳子孔里吧。
loading buffer 可能浓度不够，所以会漂的比较厉害。漏到玻璃后面的话就是胶做的不好，胶和板之间有空隙了。
我觉得不是胶的问题，点样孔有问题应该很快能看的出来。是不是移液枪用力太大啊？操作的问题。要不就是样品太多，换大孔的胶试试。