氯化钙制备感受态细胞的方法常用在细菌上,能不能用在酵母菌上啊?如果不能的话,转化酵母菌用什么办法?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/26 20:04:07
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氯化钙只能制作细菌感受态,酵母菌要用冷的山梨醇洗 .
平板筛选毕赤酵母GS115单菌落后,制备1 mL菌液接种于100 mL YPD液体培养基中,30 ℃200 rpm培养约15 h,使菌浓度达到OD600
1.1.5左右后,冰浴降温.4℃、5000 rpm离心5 min,弃上清,使用100 mL冰ddH2O重悬.4℃、5000 rpm离心10 min,弃上清,使用50 mL冰ddH2O重悬.4℃、5000 rpm离心10 min,弃上清,使用20 mL 1M冰山梨醇重悬.4℃、5000 rpm离心10 min,弃上清,使用200 μL 1M冰山梨醇重悬.取80 μL感受态细胞加入电转杯,轻弹沉底,加入10 μL纯化后的质粒轻轻吸打混匀,2.5 kV电击.电击后迅速加入1 mL冰山梨醇混匀,涂布于含有筛选抗生素的YPD培养基中.30 ℃倒置培养3天,挑取饱满白色圆形菌落进行菌落PCR.
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