ELISA技术和WESTERN的不同是什么
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 23:00:11
ELISA技术和WESTERN的不同是什么
ELISA技术和WESTERN的不同是什么
ELISA技术和WESTERN的不同是什么
酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验（又称酵素免疫分析法,Enzyme-linked immunoassay,简称ELISA）利用抗原抗体之间专一性键结之特性,对检体进行检测；由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计其键结机制后,配合酵素呈色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用呈色之深浅进行定量分析.根据待测样品与键结机制的不同,ELISA可设计出各种不同类型的检测方式,主要以三明治法（sandwich）、间接法（indirect）、以及竞争法（Competitive）三种为主.
Western blot
是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,也是HIV检测的方法之一.
利用特定抗体能够专一结合其抗原蛋白质的原理来对样品进行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息,来分析检测特定蛋白质的生物学检测技术.
发明者一般认为是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克（George Stark）.在尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981年所著的《分析生物化学》（Analytical Biochemistry）中首次被称为Western Blot.
Western Blot与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗.经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变.以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分.该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达.
免疫学三大工具，免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量，各有各的功能。
Western用于测分子量，ELISA用于测浓度。
他们在测量前都要一个尺子（标准），但Western的尺子上标的是分子量（KD），ELISA的尺子上标的是浓度。
Western用的是蛋白MARKER（已知大小的几条蛋白），与蛋白一起电泳（不同泳道），实验结束后知道目标蛋白的大小...
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免疫学三大工具，免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量，各有各的功能。
Western用于测分子量，ELISA用于测浓度。
他们在测量前都要一个尺子（标准），但Western的尺子上标的是分子量（KD），ELISA的尺子上标的是浓度。
Western用的是蛋白MARKER（已知大小的几条蛋白），与蛋白一起电泳（不同泳道），实验结束后知道目标蛋白的大小。
ELISA用的是标准品（已知浓度的蛋白，自己稀释成不同浓度），与未知相本一起反应（不同孔），实验结束后判断目标蛋白的浓度。
至于他们的后期原理，都是用抗体与目标蛋白反应，再加一个HRP标记的二抗，HRP可以让DAB显色（Western是DAB或者ECL发光，在膜上显色，而ELISA用TMB显色，颜色在孔里面，）
当然，实际操作也没这么简单，但后期利用的原理是相当的。
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