用于观察线粒体的荧光染色剂用在激光扫描共焦显微镜上
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/08/15 10:45:04
用于观察线粒体的荧光染色剂用在激光扫描共焦显微镜上
用于观察线粒体的荧光染色剂
用在激光扫描共焦显微镜上
用于观察线粒体的荧光染色剂用在激光扫描共焦显微镜上
健那绿(Janus green B)染液
健那绿(Janus green B)染液是专一性染线粒体的活细胞染料,可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色,而细胞质接近无色.
健那绿
罗丹明123染色检测线粒体膜电位
外观:红棕色粉末
化学名:Rh123 罗丹明123
别名: Rhodamine 123; Rh123
分子式:C21H17CLN2O3
分子量:380.82
配制:罗丹明123粉剂用甲醇配成1mg/mlde 储备液,染色时用DPBS缓冲液将其稀释为所需浓度
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罗丹明123染色检测线粒体膜电位
外观:红棕色粉末
化学名:Rh123 罗丹明123
别名: Rhodamine 123; Rh123
分子式:C21H17CLN2O3
分子量:380.82
配制:罗丹明123粉剂用甲醇配成1mg/mlde 储备液,染色时用DPBS缓冲液将其稀释为所需浓度
保存:冰箱-20度避光
一、检测原理:
罗丹明123(Rhodamine 123)是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料,是一种线粒体跨膜电位的指示剂。其在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质,荧光强度减弱或消失。而在凋亡发生时,线粒体膜完整性破坏,线粒体膜通透性转运孔开放,引起线粒体跨膜电位(ΔΨm) 的崩溃, Rh123 重新释放出线粒体, 从而发出强黄绿色荧光,可用荧光显微镜、荧光光度计或流式细胞仪检测,通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化和凋亡的发生,可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。
二、 使用方法:
1.细胞染色及分析
(1)培养细胞1×106/mL重悬于培养基中;
(2)加入罗丹明123染液0.1μg/mL~50 μg/mL (根椐细胞种类不同而浓度不同,一般3~10 μg/mL);
(3)37℃,5% CO2细胞培养箱孵育1~30 min(根椐细胞种类不同而不同,一般10 min);
(4)离心以培养基洗细胞两次;
2. 组织提取的线粒体染色及分析
(1)按常规方法提取的线粒体,用适量的1×Assays Buffer(将5×Assays Buffer 用水稀释5倍)重悬;
(2)常规方法进行蛋白含量测定后,用1×Assays Buffer调配成3mg/mL的线粒体溶液;
(3)取2mL 1×Assays Buffer和1mL线粒体溶液;
(4)加入适量待测化合物(同时设空白对照组),250C保温min;
(5)加入罗丹明123染液10 μL;
(6)荧光光度计检测:上述混合液全部加入石英比色皿中,置于250C下测定,激发波长488~505nm,发射波长530nm,连续记录从0 min~30 min内荧光强度的变化。
三、注意事项
1、操作时需戴手套
2、罗丹明123为通透性染料,可以自由进入细胞
3、孵育时,必须避免光照
4、使用时,避免污染母液
5、染色完成后,即刻进行荧光检测分析
收起