高效液相色谱仪的特点?

高效液相色谱仪的特点?
高效液相色谱仪的特点?

高效液相色谱仪的特点?
1.进样系统
一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的.这对提高分析样品的重复性是有益的.
2.输液系统
该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分.高压泵的一般压强为l．47～4．4X107Pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时,可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的.流动相贮存错和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等.这就可使各种物质（即使仅有一个基团的差别或是同分异构体）都能获得有效分离.
3.分离系统
该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等.色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时,可在二者之间加一连接管）,内径为2～5mm,由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成,住内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成）．固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成,它们都有惰性（如硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔径可达1000?）和比表面积大的特点,加之其表面经过机械涂渍（与气相色谱中固定相的制备一样）,或者用化学法偶联各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物.因此,这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性.例如,在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后,就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来.
另外,固定相基质粒小,柱床极易达到均匀、致密状态,极易降低涡流扩散效应.基质粒度小,微孔浅,样品在微孔区内传质短.这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的.根据柱效理论分析,基质粒度小,塔板理论数N就越大.这也进一步证明基质粒度小,会提高分辨率的道理.
再者,高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C,通过改善传质速度,缩短分析时间,就可增加层析柱的效率.
检测系统
高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种.
紫外检测器
该检测器适用于对紫外光（或可见光）有吸收性能样品的检测.其特点：使用面广（如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；灵敏度高（检测下限为10-10g／ml）；线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品.
示差折光检测器
凡具有与流动相折光率不同的样品组分,均可使用示差折光检测器检测.目前,糖类化合物的检测大多使用此检测系统.这一系统通用性强、操作简单,但灵敏度低（检测下限为10-7g／ml）,流动相的变化会引起折光率的变化,因此,它既不适用于痕量分析,也不适用于梯度洗脱样品的检测.
荧光检测器
凡具有荧光的物质,在一定条件下,其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比.因此,这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定,其灵敏度很高（检测下限为10-12～10-14g／ml）,痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用.
5.数据处理系统
该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作,使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展.

1．高压：液相色谱法以液体为流动相(称为载液)，液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。
2.高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h。
3.高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。

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1．高压：液相色谱法以液体为流动相(称为载液)，液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。
2.高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h。
3.高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。
4.高灵敏度：高效液相色谱仪已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。
5.适应范围宽：高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大的有机物，原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。

收起

　　高压——压力可达150～300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。
　　高速——流速为0.1～10.0 mL/min。
　　高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
　　高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。
　　HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：
　　速度快——通常分...

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　　高压——压力可达150～300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。
　　高速——流速为0.1～10.0 mL/min。
　　高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
　　高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。
　　HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：
　　速度快——通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
　　分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。
　　灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。
　　色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。
　　样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

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主要是输液系统和分离系统