给定一个cDNA序列,如何表达,纯化到蛋白质?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/23 11:34:09
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首先根据蛋白性质及实验要求选择表达载体,比如是原核还是真核表达,是否加标签,是否控制表达位置及强度等.
然后根据载体和目的蛋白设计引物,要考虑加酶切位点,保护碱基等.
其次选择合适组织提取RNA,RT-PCR,酶切,克隆,鉴定,扩增质粒,转入宿主,诱导表达,纯化,鉴定.
PCR，然后产物连接到pMD-T19上，注入到大肠杆菌中扩增，提取质粒，再通过酶切，连接到表达载体中，转入到表达菌种中，诱导表达，提取总蛋白，SDS检测，OK
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