western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要清洗滤膜上的磷酸盐,磷酸盐对后续的加入二抗有什么影响?一抗孵育完成后，我是知道洗

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/11/25 13:49:19

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western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要清洗滤膜上的磷酸盐,磷酸盐对后续的加入二抗有什么影响?
一抗孵育完成后，我是知道洗膜的，可是《分子克隆》上说要清洗掉磷酸盐与叠氮钠，清洗叠氮钠我知道为什么，可是不知道为什么要清洗掉磷酸盐，因为在网上有不少资料在洗膜过程中是不用换掉PBS的（因PBS中含有磷酸盐），可是《分子克隆》上说要在一抗孵育完成后用TBST洗滤膜，

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一抗孵育完成后洗膜是为了洗掉未和膜结合的抗体,而不是磷酸盐.只有洗干净非特异性结合在膜上的一抗,加二抗时才不会因非特异结合而呈现很重的背景.至于是使用PBS(T)还是TBS(T),这要具体看你的二抗种类.PBS不适合AP系列,PBS/TBSS适合AP和HRP体系.另外,做磷酸化蛋白的WB,PBS不合适.

一抗孵育完了要用PBST或TBST洗掉未结合抗原的一抗，一抗不洗干净显色以后背景会很重。

就是洗叠氮钠和非特异结合的一抗的，磷酸盐只是缓冲环境，当然有人不喜欢用PBST洗，有人用TBST洗，就是一个磷酸盐缓冲环境和Tris的缓冲环境而已，个人喜好。

有可能你看错了，就一般的理解，是没有必要的，TBST并不是洗磷酸盐。或者二抗是AP标记的才要洗磷酸盐。
HRP标记的二抗，就算是用PBST洗，也是可以的。因为二抗可以用PBS稀释。洗去PBS是没有意义的。

封闭完可直接一抗孵育一抗完了用PBST洗三次后二抗孵育离子浓度肯定会对抗体结合有影响啦

western blot 封闭液中直接加一抗孵育可以吗? western blot中封闭起什么作用 Western blot 中脱脂奶粉封闭的是哪些蛋白?原理是什么? western blot中一抗封闭时间过长会有什么后果 Western Blot 封闭后用5%TBST清洗了3次,后果会怎么样? 由于失误western blot 封闭后用TBST清洗了几次,对结果影响大吗 Western blot 转膜后的封闭,过夜时未放到4度会怎样?如上题. western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要清洗滤膜上的磷酸盐,磷酸盐对后续的加入二抗有什么影响?一抗孵育完成后，我是知道洗 western blot 中甲醇作用 western blot 中在转膜之后为什么要进行封闭啊?据说是为了防止抗体的非特异行结合,这里的非特异性结合指的是什么啊?另外,一抗是特异性的啊还是二抗是特异性结合的? 封闭液起什么作用?例如,dot blot 分析的时候 western blot一抗后放了封闭因为失误,WB时一抗后放了封闭液,用PBST能洗掉吗?是自己用脱脂奶粉配的。经过昨天用PBST清洗后，再用二抗，结果出来了~一抗和Transfer液一般能重复回收使用几次？ western blot用的脱脂奶粉的脂肪含量?请问做封闭液的脱脂奶粉有什么要求?我买了伊利的奶粉,上面标记着脂肪含量以降低,脂肪含量9-12.这样的奶粉可以用来做封闭液吗?去超市看这已经是最低脂 western blot抗体洗脱液的配方? western blot转膜膜上有白点点怎么回事刚转膜完时膜是干净的放到牛奶封闭时突然发现膜上有白点点像是膜里有气泡的感觉,转膜缓冲液新配的没问题, ELISA中封闭的作用? 什么是Western Blot? western blot的具体步骤?