如何提细胞的组蛋白做western blot?目前在做western blot 不清楚怎么提细胞中的组蛋白怎么提,是用特殊的细胞裂解液吗?还是可以直接用核蛋白提取试剂盒呢?麻烦高手帮帮小弟.

如何提细胞的组蛋白做western blot?目前在做western blot 不清楚怎么提细胞中的组蛋白怎么提,是用特殊的细胞裂解液吗?还是可以直接用核蛋白提取试剂盒呢?麻烦高手帮帮小弟.
如何提细胞的组蛋白做western blot?
目前在做western blot 不清楚怎么提细胞中的组蛋白怎么提,是用特殊的细胞裂解液吗?还是可以直接用核蛋白提取试剂盒呢?麻烦高手帮帮小弟.

如何提细胞的组蛋白做western blot?目前在做western blot 不清楚怎么提细胞中的组蛋白怎么提,是用特殊的细胞裂解液吗?还是可以直接用核蛋白提取试剂盒呢?麻烦高手帮帮小弟.
你的意思就是提取核蛋白,提取核蛋白和提取全蛋白用的裂解液是不一样的.一般情况下我们都是买试剂盒,里面包含有细胞裂解液和核裂解液,按照说明书实用就行了.
1 20mmol/L的Hepe（PH 7.9）
2 420mmol/L NaCl
3 1.5mmol/L MgCl2
4 2%Igepal
5 0.5mmo/L EDTA
6 20%甘油
7 1mmol/L DTT
8 0.25mmol/L PMSF
9 5ug/ml Aprotinin
10 5ug/ml Pepstatin
11 5ug/ml Leupeptin
或者你可以按照这个配,这个是细胞核裂解液.
做法就是,你按顺序提了全蛋白以后把上清弃掉,在沉淀中加入这个核裂解液,震荡然后离心,此时上清就是核蛋白了.

差速离心先分离出细胞核，然后可以抽总核蛋白做WB。钱多的话有专门的试剂盒提组蛋白的。

通过有机溶剂或水溶法制备总蛋白
水溶液提取法
针对水、稀盐、稀酸或碱溶液中的蛋白质。稀盐和缓冲系统的水溶液
对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂 。
细胞裂解液： 50 mmol/L Tris-HCl, 150 mmol/L Nacl ,5 mmol/L EDTA, 1%NP40 ， 0.05% PMSF ， 2μg/mL ...

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通过有机溶剂或水溶法制备总蛋白
水溶液提取法
针对水、稀盐、稀酸或碱溶液中的蛋白质。稀盐和缓冲系统的水溶液
对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂 。
细胞裂解液： 50 mmol/L Tris-HCl, 150 mmol/L Nacl ,5 mmol/L EDTA, 1%NP40 ， 0.05% PMSF ， 2μg/mL Aprotinin, 0.5μg/mL Leupeptin ， pH8.0
有机溶剂提取法
对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取，包括乙醇、
丙酮和丁醇等。
通过层析或电洗脱法制备目的蛋白
Bradford法
考马斯亮蓝G-250有红、蓝两种不同颜色的形式，在一定浓度的乙醇和酸性条件下，可配成淡红色的溶液，与蛋白结合后形成蓝色化合物，该化合物在595nm处有最大吸收值，化合物颜色深浅与蛋白的浓度高低成正比 。(上样量)
试剂：考马斯亮蓝工作液，0.1N盐酸，双蒸水，蛋白标准液（ 将10mg/ml蛋白溶液稀释至4.0mg/ml, 3.5mg/ml, 3.0mg/ml, 2.5mg/ml, 2.0mg/ml, 1.5mg/ml, 1.0mg/ml, 0.5mg/ml。）
SDS 是一种离子性的界面活性剂,它有强离子性的硫酸根离子也带有疏水
性的长碳链.当 SDS 与蛋白质混合时,它会以其碳链与蛋白质之疏水性胺
基酸结合将蛋白质包起来,而以硫酸根离子外露与水分子作用.大多数蛋
白质和 SDS 的平均结合量是 1:1.4 (以重量为单位),而蛋白质结合固定
比例之 SDS 后,由於 SDS 带强负价,使蛋白质原先的带电价微不足道,且
每单位重量之蛋白质带电价一致 (charge density),所以决定不同蛋白的泳动速率就只剩下分子大小一项因素
把硝酸纤维素滤膜放在密闭塑料袋或者培养皿中，根据滤膜面积以0.1ml/cm2的量加入加入一抗溶液与滤膜温育。37℃一小时，4 ℃过夜。
倒掉一抗溶液，用PBS漂洗液滤膜3次，每次10min。
加入用封闭液配制的二抗，摇床上缓慢摇动， 37℃一小时，4 ℃过夜。
倒掉一抗溶液，用PBS漂洗液滤膜3次，每次10min

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干嘛非要提组蛋白呢？直接提取细胞总蛋白，然后用组蛋白的抗体检测就是了，裂解液就用一般的就是了