考马斯亮蓝法测蛋白质时为什么浓度越高而吸光度越低我在用考马斯亮蓝测定透明质酸中的蛋白质时,吸光度还没有空白样的吸光度高,指针向反方向打,有时会出现浓度越高而吸光度越低,带入

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/22 21:46:57
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考马斯亮蓝法测蛋白质时为什么浓度越高而吸光度越低
我在用考马斯亮蓝测定透明质酸中的蛋白质时,吸光度还没有空白样的吸光度高,指针向反方向打,有时会出现浓度越高而吸光度越低,带入标准方程中为负数,麻烦你们能告诉我该怎么办?
在做标准曲线时没问题,可是在测样品时,就会出现吸光度为负数的问题 糖胺聚糖怎么去除

考马斯亮蓝法测蛋白质时为什么浓度越高而吸光度越低我在用考马斯亮蓝测定透明质酸中的蛋白质时,吸光度还没有空白样的吸光度高,指针向反方向打,有时会出现浓度越高而吸光度越低,带入
透明质酸中的蛋白质指的是一种蛋白聚糖中的蛋白质吗,是否应该考虑除去其中的糖胺聚糖,将蛋白质纯化,因为考马斯亮蓝需要与蛋白质结合才能显色,样品中的糖胺聚糖可能有影响,或者是样品污染
考马斯亮蓝溶液应为酸性,并且变成蓝绿色是就不能再使用了
实验时一定要最后加入蛋白质溶液,
另外,样品中的Tris、乙酸、2-巯基乙醇、EDTA等物质对实验结果有少量颜色干扰,可以在做标准曲线时可以用缓冲液代替蒸馏水,就可以将干扰扣除,
但是大量的去污剂如SDS对颜色的影响太大不容易去除,只能想办法从样品中去除去污剂,

请问你做好标准蛋白曲线了吗?我这两周做的也是蛋白测定的实验,测定的吸收峰不规律的主要原因应该是试剂的问题,现在市售的很多蛋白和亮蓝质量都很差劲,亮蓝即使是进口的效果也不好,(我的最先买的试剂,标准蛋白都测不到吸光度)建议你找个大点的公司,试剂换一下,结果应该就会好了,亮蓝跟蛋白的结合专属性还是很强的,这个方法应该不用怀疑...

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请问你做好标准蛋白曲线了吗?我这两周做的也是蛋白测定的实验,测定的吸收峰不规律的主要原因应该是试剂的问题,现在市售的很多蛋白和亮蓝质量都很差劲,亮蓝即使是进口的效果也不好,(我的最先买的试剂,标准蛋白都测不到吸光度)建议你找个大点的公司,试剂换一下,结果应该就会好了,亮蓝跟蛋白的结合专属性还是很强的,这个方法应该不用怀疑

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