高效液相色谱法测定食品中糖精钠为什么使用0.02mol/L醋酸铵溶液?

高效液相色谱法测定食品中糖精钠为什么使用0.02mol/L醋酸铵溶液?
高效液相色谱法测定食品中糖精钠为什么使用0.02mol/L醋酸铵溶液?

高效液相色谱法测定食品中糖精钠为什么使用0.02mol/L醋酸铵溶液?
没有什么为什么,即使不用乙酸铵,其实用其他盐也是可以跑出来的,但是用乙酸铵有一个好处,就是这个流动相可以做MS-LC,不需要重新摸索流动相.
参考下这个吧,虽然不一定有用,推荐你一本书,《高效液相色谱法的建立》是译著,很有用.
反相色谱中如何选择缓冲液
化合物的划分
HPLC分离的样品从其在分离体系内（或者说是流动相下）的状态来划分,可以分为中性样品和离子型样品.所谓中性样品就是在分离条件下不能解离的化合物,而离子型化合物则能够解离出离子.换句话说,离子型样品是指酸碱盐类的化合物,而中性化合物是除此之外的化合物.
有盐流动相好在那里
反相色谱（RPC）分离样品主要基于待分离化合物的极性实现分离的.在其他条件相类似的情况（分子量、空间结构）下极性强的物质保留值小.对于中性样品来说其极性取决于化合物本身,但是对于离子型化合物可以通过调整其是否解离或者解离程度来调整其极性,最终达到调整其保留值、分离度和拄效（一般保留值提前会带来拄效的提高）.
在分离含有少数化合物待检样品的情况下,使用无盐流动相是一般是可行的（可以不考虑其是否全部或者部分未中性化合物）.因为分离的化合物少,可能分离度方面的要求相对不是很重要,而保留值的调整还可以采用调整流动相的洗脱能力、流速等条件得以实现..此时需要尝试采用有盐流动相,也就是要用到缓冲液.但是对于分离多组分的样品采用无盐流动相往往就会遇到麻烦当然如果样品中的化合物全部都是中性化合物采用有盐流动相也是很难奏效的,可是这样的时候毕竟比较少.所以,在分离多组分待检样品时如果无盐缓冲液效果不好,要首先考虑有盐流动相.
缓冲液
缓冲液是能够提供共轭酸碱对,在一定条件下稳定pH值的一种溶液.使用缓冲液就可以控制分离过程中的p H,进而控制化合物的解离程度,达到调整化合物极性的目的.
缓冲液控制pH的能力就是缓冲液的缓冲容量.其大小由三方面因素决定,分别是：所要控制的pH、缓冲盐的pKa和缓冲盐的浓度.这里就涉及你要控制的pH和选用的缓冲盐的关系,好在这方面的数据一般的色谱书中都会有提及,查一查就可以解决问题.关于缓冲盐浓度认为采用30mM是比较好的,这是一个通常的参数,一般来讲进样量越少、分子量越大、酸碱官能团越少选用的盐浓度可以越小.缓冲盐浓度越小对仪器和色谱拄越好.
缓冲液的选择
对于已知化合物来说这个比较容易.如果是一个碱性化合物,在无盐流动相下保留时间过长,那么可以采用控制流动相为低pH条件,使其达到完全解离,增加其极性,达到缩短分离时间的目的.如果分离的化合物pKa比较低（酸性化合物）,在无盐流动相下保留时间比较长,可以采用控制流动相为高一些的pH条件,道理相同.对于保留时间过短的采用相反的调整方式即可,不赘述.
对于分离多个组分而且未知化合物组成的样品就显得比较麻烦了.缺少相关分离样品的资料只能从实验入手了.也就是说尝试各种pH值的流动相（期间最好有机相的比例固定）,一般来说从低pH试起是一个比较好的选择,因为我做过的化合物多是碱性化合物（这点仅当参考）,再有常用ODS柱子适用pH范围相对第一些.
另外,在调试分离最佳的pH条件的时候,可以采用一种盐——枸橼酸盐,其有点是在Ph2.6.4之间等体积混合相同浓度不同pH的缓冲液,混合后的pH值几乎是两者的平均值.声明这一点我没有试验过,从书上看来的.如果这样,在有双通道仪器上调整流动相的pH值将会非常方便.确定好了pH值,然后在换成常用的缓冲盐就OK了.
上面说的是pH范围的选择.在确定了分离最适合的pH之后,就是确定用那种缓冲盐了.一般从两个方面考虑,一是溶解度,要求在所用的有机相比例下易溶解,否则容易造成系统内缓冲盐析出；二是要考虑截至波长的问题.磷酸盐是比较常用的,可以有两个缓冲范围2.3.0和6.8.2,截至波长小于200nm.注意：缓冲盐中的杂质可能严重影响其截至波长.碳酸盐也不错,但是在低pH会有CO2放出,可能导致缓冲效果降低.
缓冲液的制备
流动相的pH就指的是流动相中缓冲液的pH值.不要把有机相混入缓冲液之后再调其pH.
流动相或者缓冲液过滤的问题.有人倾向于先过滤缓冲液然后混合有机相使用.也有的是有机相与缓冲液混合之后统一过滤.虽然各有缺点,但我认为第二种做法更好些.因为毕竟这样做最仪器和柱子更为保险些,虽然有可能在抽了过程中有可能引起部分溶剂挥发,但我认为可以忽略之.
缓冲液不易长时间防止,尤其是夏天,会生细菌.2天内使用比较合适.
系统冲洗
用缓冲液的系统用过后一定、务必要冲洗.用过渡流动相是一种好办法.过渡流动相就是分析用流动相中去掉无机盐.但是有机相比例较少的最好不要用过渡流动相冲洗.
结束语
采用有盐流动相是反相色谱普中常用的方法,尤其适合分离离子型化合物.只是也有其缺点就是仪器维护上稍微费事点.这种方法不能解决分离中的所有问题,有些复杂样品必须借助于梯度洗脱或者离子对色谱.