高效液相色谱仪器使用方法

高效液相色谱仪器使用方法
高效液相色谱仪器使用方法

高效液相色谱仪器使用方法
转载：《分析测试百科网》高效液相色谱仪（Agilent 1100型）操作规程
不知道楼主要什么型号的液相色谱使用方法?
一、 开机
1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水,不能使用超过3天的注射用水,以防止长菌或长藻类）； 把流动相放入溶剂瓶中.A瓶：为水相 B瓶：为有机相.
2、打开电脑,选Win 2000,进入Win 2000界面.
3、双击CAG Boodp server图标,放大CAG Boodp server小图标,出现窗口,5min内打开液相各部件电源开关,等待1100广播信息后,表示通讯成功连接,关闭CAG Boodp serve窗口.
4、双击online图标,仪器自检,进入工作站.
该页面主要由以下几部分组成：
——最上方为命令栏,依次为File,Run Control,Instrumen…等；
——命令栏下方为快捷操作图标,如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等；
——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告；
——中下部为动态监测信号；
——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等.
4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面.
二、 编辑参数及方法
1、开始编辑完整方法：
从“Method”菜单中选择“New method”,出现DEF-LC.M,从“Method”菜单中选择“Edit entire method”,选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项,单击OK,进入下一画面.
2、方法信息：
在“Method Comments”中加入方法的信息,如方法的用途等.单击OK,进入下一画面.
3、泵参数设定：
进入“Setup pump”画面,在“Flow” 处输入流量,如1ml/min；在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0,（A=100-B）,也可在Insert 一行“Timetable”,编辑梯度；输入保留时间；在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子.单击OK,进入下一画面.
4、DAD检测器参数设定：
进入“DAD signals”画面,输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽（参比波长带宽默认值为100nm）； 选择Stoptime：as Pupm；
在“Spectrum”中输入采集光谱方式“store”：选All；如只进行正常检测,则可选None； 范围Range：可选范围为190~950nm； 步长Step可选2.0nm；
阀值： 选择需要的灯；
Peak width（Response time）即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽,可选“2s”或4s；
Slit-：狭窄缝,光谱分辨率高；宽时,噪音低.可选4nm
单击OK,进入下一画面.
5、进入“Signal Details”画面,单击OK,进入下一画面.
6、进入“Edit Integration Events”（编辑积分结果）画面,单击OK,进入下一画面.
7、进入“Specify report”（积分参数）画面,单击OK,进入下一画面.
8、进入“Instrument curves”画面,单击OK,进入下一画面.
9、进入“Run Time checklist”（运行时间表）画面,选择“Date Acquistition”和“Standard Date Analsis”,单击OK,完成参数设定,回到工作站画面.
10、单击“Method”菜单,选中“Save method as”,输入文件名,单击OK.（路径：e\HPCHEM\1\methods\***）
注：如果调用一个方法,则在“Method”菜单,选中“Load method”,选方法名,单击OK.
11、从菜单“View”中选择“Online signal”,选中Window 1 ,然后单击Change钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点OK.（如同时检测二个信号,则重复11,选中Window 2）.
三、运行样品
1、单击泵（Pump）图标下面的小瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,并且选停泵体积.单击OK.
2、手动打开Purge阀：逆时针转2~3圈.
3、单击泵（Pump）图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入泵编辑画面.设Flow：5ml/min,单击OK.
4、开泵：直接点Pump图标下面的泵开关小图标,或单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pump contrlo选项,选中On,单击OK.
5、系统开始排液（Purge）,直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续排液,直到所有通道无气泡为止.（每个管线内液体约20ml,在5ml/min的流速下,均需4~5min才能排完）
6、单击泵（Pump）图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入泵编辑画面.把Flow改为0.5~1.0ml/min,单击OK.
7、等待流速降下来后,关闭排液阀.
8、待压力稳定后,从“Instrument”菜单中选择“System on”或单击GUI图标的On图标启动系统.开始走基线,并可选择观察信号.
注：仪器运行过程,画面颜色由灰色转变成黄色或绿色,当各部件都达到所设参数时,画面均变为绿色,左上角红色的“not ready”变为绿色“ready”,表明可以进行分析.（此时如果要终止仪器的运行,可单击流程图右下角的“off”,再单击“Yes”,关闭输液泵和检测器氘灯）.
9、单击最大化按钮,将online Plot窗口放大.待基线平稳后,点信号窗口的“Banlance”,调至零点.
10、等仪器Ready ,从“Runcontrol”菜单中选择F5或“Run method”.
11、编辑样品信息：
从“Run control”菜单中选择“Sample into”选项,选择“Sample Info…..”,即打开了样品信息页面,输入操作者（Operator Name）、数据存贮通道（Subdirectory）、样品名（Sample Name）、进样瓶号（Vial）、浓缩因子（Multipline）、稀释因子（Dilution）、,“Data file”中选择 “Prefix”,在Prefix框中输入批号或日期等,在Counter框中输入计算器的起始位,仪器会自动命名.（样品量（Sample Amount）、内标量（ISID Amount）可不选,Location只对自动进样器有用,不填则走空白,检查干扰峰的来源.）
单击OK.
12、进样分析：
进样阀扳到Load位置,插入注射器,注样品,进样后扳动阀至Inject位置.
13、进样分析结束,点Close键退出样品分析.
（注意：检测完尽量要关DAD的灯,以保持灯的寿命.单击DAD图标,出现参数设定菜单,单击control ,选择关灯.）
四、数据分析方法编辑（可在offline下操作）
1、 从“View” 菜单中选“Date analysis”进入数据分析画面.该页面最上方为命令栏,依次为File ,Graphics,Integration……等.命令栏下为快捷操作图标,如积分、校正、色谱图、单一色谱图调用、多色谱图调用、调用方法、保存等.
2、 从“File”菜单中选“Load signal”,或单击快捷操作的“单一色谱图调用”图标,选择色谱图文件名,单击“OK”,画面中即出现所调用的色谱图.
3、 做图谱优化,从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项.从Ranges中选择Auao scale及合适的显示时间,单击OK,或选择“Use Ranges”调整.反复进行,直到图的比例合适为止.
4、 积分
（1）先调用所要分析的色谱图,从“Integration”中选择“Auto integrate”,从“Integration”中选择“Integration Results”,此时仪器将内置的积分参数给出积分结果.如积分结果不理想,再从“Integration”菜单中选择“Integration Events”选项,或单击快捷操作的“编辑/设定积分表”图标,此时,在屏幕下方左侧出现积分参数表,右侧为积分结果,在积分参数表中按实际的要求输入修改的参数,如斜率（Slope sensitivity）、峰宽（Peak width）、最小峰面积（Area reject）、最低峰高（Height reject）等.
（2）从“Integration”中选择“Integrate”选项或单击快捷操作的“对现有色谱图积分”图标,仪器即按照新设定的积分参数重新积分.
（3）若积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止.
（4）完成后,单击左边的“ˇ”图标,将积分参数存入方法.
5、 打印报告：
（1）从“Report”菜单中选择“Specify report”选项,或单击最右侧快捷操作的“定义报告及打印格式”（右下角带叉的报告画面）图标,进入打印画面.
（2）根据实际要求选择报告的格式和输出形式等.可在“Calculate”右则的黑三角中选“Percent”（面积百分比）,其它项不变.（如 “Destination”项下选择“Screen”； “Based On”选“Area”；“Sorted By”选“Signal”；“Repirt Style”选“Short”；选择“Add chromatogram Output（打印色谱图）”；选择“With Calibrated Peaks”；选择“Portrait”；可根据需要选择“Size”）.
（3）单击OK.
（4）选择快捷操作的“报告预览”图标,可预览报告的全貌.从“Report”菜单中,选择“Print Report”,则报告打印到屏幕上,如想输出到打字机上,则单击“Print”,即可进行报告的打印.最后,单击“close”退出此操作页面.
6、 定量分析
如果需要进行标准曲线制备,可按此项进行操作.
（1）一级校正表的建立：
在“Data Analysis”界面下,调用最低浓度的色谱图,在“栏“Calibration”下,选择“New Calibration Table”,选择“Automatic Setup Level”,并设校正级数为 “1”,单击“OK”.在画下方左侧出现校正表,右侧为校正图.在画面左下侧的校正表中选择所要的色谱峰,输入校正级数、化学物名称及浓度,如果采用内标法,需对内标峰进行标记.单击OK,工作站提示是否删除0浓度行,单击Yes .
（2）二级校正表的建立：
调用第二个色谱图,在命令栏“Calibration”下,选择“Add Level”,设为“2”,单击“OK”,在画面左下侧的校正表中输入校正级数、化学物名称及样品浓度.（如需对校正表中的某些数据进行重新修正,可调用新的图谱,在命令栏“Calibration”下,选择“Recalibration”,并在校正表中输入校正级数,样品浓度.）此时,校正表右侧自动绘制各组分的标准曲线,并进行线性回归.单击校正表中的“Print”,可进行打印.
五、关机
1、 关机前,用过缓冲盐溶液必须先用100%的水冲洗系统（打开排液阀,调流速为5ml/min,冲洗约5 min,然后调流速为1ml/min,待流速降下来后,关闭排液阀,再冲洗冲洗约20 min）；然后用甲醇同法清洗20min,然后关泵.
注意：此方法适用于反相色谱柱,而正相色谱柱应用适当的溶剂冲洗.
2、清洗进样器：
将进样器扳至Load的位置,用专用的注射器装约10ml适当溶剂冲洗进样器.
当使用缓冲溶液时,要用水冲洗进样口,同时扳动进样阀数次,每次数毫升.
3、退出化学工作站,及其它窗口,关闭计算机（用shut down）.
4、关掉Agilent 1100电源开关.
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