C18色谱柱问题新买的C18色谱柱,第一次用时塔板数在2万以上.保存后隔了4天再用,同一样品塔板数掉到几百,而且峰型和保留时间变化很大,不明白是什么原因,用完后我先用10%的甲醇冲洗了20个柱
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/24 04:21:22
C18色谱柱问题新买的C18色谱柱,第一次用时塔板数在2万以上.保存后隔了4天再用,同一样品塔板数掉到几百,而且峰型和保留时间变化很大,不明白是什么原因,用完后我先用10%的甲醇冲洗了20个柱
C18色谱柱问题
新买的C18色谱柱,第一次用时塔板数在2万以上.保存后隔了4天再用,同一样品塔板数掉到几百,而且峰型和保留时间变化很大,不明白是什么原因,
用完后我先用10%的甲醇冲洗了20个柱体积，然后再用100%甲醇保存的。
C18色谱柱问题新买的C18色谱柱,第一次用时塔板数在2万以上.保存后隔了4天再用,同一样品塔板数掉到几百,而且峰型和保留时间变化很大,不明白是什么原因,用完后我先用10%的甲醇冲洗了20个柱
你怎么保存的?
用的时候不能用酸性碱性过强的流动相,用完后一定要用有机相和水相梯度冲洗几遍（可能的话直接冲过夜）,尤其是你用的流动相有酸、碱、缓冲液、盐等东西的时候一定要换成蒸馏水好好冲洗.
另外最后保存的时候一定要把柱子里灌满有机溶解（甲醇或乙腈）,冲至平衡,一定不能留水在里面（尤其是酸性的水液）.
20个柱体积不够,你是不是用酸碱盐了?你最好用甲醇（乙腈）-水 梯度100%-10% （每次梯度至少20min）反复洗涤,另外用乙腈保存比甲醇好.
应该没有那么复杂，就本人的经验，向你提供几种可能：
1. 柱子连接问题，柱头留了较大的死体积，形成两次展宽——解决办法，重新连接柱子；
2. 如果保留时间大幅提前，则可能是10%的甲醇冲的时间太长了，形成疏水塌陷——解决办法，用甲醇和乙腈交替冲柱，各10倍柱体积就行了，反复2次；
3. 流动相里混进了碱，柱子报废——解决办法，换柱子；
4. 做的样品是蛋白质、多肽等...
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应该没有那么复杂，就本人的经验，向你提供几种可能：
1. 柱子连接问题，柱头留了较大的死体积，形成两次展宽——解决办法，重新连接柱子；
2. 如果保留时间大幅提前，则可能是10%的甲醇冲的时间太长了，形成疏水塌陷——解决办法，用甲醇和乙腈交替冲柱，各10倍柱体积就行了，反复2次；
3. 流动相里混进了碱，柱子报废——解决办法，换柱子；
4. 做的样品是蛋白质、多肽等大分子物质，因在柱上吸附致柱效下降——解决办法，用0.1%TFA（水）和0.1%TFA（乙腈：异丙醇（1：2）），倒冲，跑0-100%的梯度3次；（这种情况下应该用300埃的柱子，90埃的容易堵）；
5. 操作错误，如流动相用错等——解决办法，仔细核对色谱条件；
就这么多了，希望能有帮助，也希望知道真实原因。
收起
新买色谱柱需要看厂家出厂的时候用什么溶剂保存的额，再进行相应的处理，使用，保存，正常情况下最好用甲醇与水比例八十五比十五的比例保存的，纯有机相容易挥发的，即使你密封两端了