已知一种无色溶液中含有ATP、AMP,请问：（1）选用什么试验方法予以区分和鉴定?（2）其原理各是什么?（3）列出主要的仪器和材料?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/28 22:08:38
已知一种无色溶液中含有ATP、AMP,请问：（1）选用什么试验方法予以区分和鉴定?（2）其原理各是什么?（3）列出主要的仪器和材料?
已知一种无色溶液中含有ATP、AMP,请问：
（1）选用什么试验方法予以区分和鉴定?
（2）其原理各是什么?
（3）列出主要的仪器和材料?
已知一种无色溶液中含有ATP、AMP,请问：（1）选用什么试验方法予以区分和鉴定?（2）其原理各是什么?（3）列出主要的仪器和材料?
在pH4.8电泳缓冲液条件下,带有不同量磷酸基团的AMP、ADP、ATP解离之后,带有负电荷量的顺序为：ATP＞ADP＞AMP,它们在电场中移动速度不同,从而得到分离.又利用核苷酸类物质的碱基具有紫外吸收性质,将分离后的电泳醋酸薄膜放在紫外灯下,可见暗红色斑点,参照标准样品在同样条件下的电泳情况,对混合试样分离后的各组分进行鉴定.
三、仪器与试剂
1．仪器
（1）电泳仪、电泳槽（平板式）
（2）紫外灯
（3）电吹风、医用镊子
（4）醋酸纤维素薄膜（8 cm×12cm）
（5）微量进样器（10μL或50μL）
2．试剂
（1）柠檬酸缓冲液（pH4.8）：称取柠檬酸8.4g,柠檬酸钠17.6g,溶于蒸馏水,稀释到2000mL.
（2）标准腺苷酸溶液：用蒸馏水将纯AMP、ADP、ATP分别配成100mg/10mL溶液.其中AMP需略加热助溶.置冰箱备用.
（3）混合腺苷酸溶液：分别取上述标准液AMP、ADP、ATP各1份等量混匀.置冰箱备用.
四、操作步骤
1．点样：将醋酸纤维素薄膜放入pH4.8柠檬酸缓冲液中,待膜完全浸透（约0.5h）后用镊子取出,夹在清洁的滤纸中间,轻轻吸去多余的缓冲液,仔细辨认薄膜无光泽面,用微量进样器在无光泽面上点样.点样点距薄膜一端1.5cm,样点之间距离1.5cm.点样量为2～3μL,按少量多次原则分2~3次点完.
2．电泳：向两个电泳槽内注入pH4.8的柠檬酸缓冲液,缓冲液的高度约为电泳槽深度的3/4.（注意：两槽中电泳液面一致）.用宽度与薄膜相同的滤纸作“滤纸桥”连接醋酸纤维素薄膜和两极缓冲液.待滤纸全部被缓冲液浸湿后,将已点样薄膜的无光泽面向下贴在电泳槽支架的“滤纸桥”上.
点样端置于负极方向,盖上电泳槽盖,接通电源,在电压降为10V/cm的条件下进行电泳,一小时后关闭电源,取出醋酸纤维素薄膜,用电吹风吹干.
3．鉴定：用镊子小心地将吹干的薄膜放在紫外灯下观察,用铅笔划出各腺苷酸电泳斑点,并标明各斑点的腺苷酸代号.
绘出三种标准核苷酸及样品的电泳图谱,以标准单核苷酸的迁移率作标准,鉴别试样中各组分.
五、附 注
1．电泳前,一定要检查电极正负极与薄膜方向,确定负极接在薄膜的点样一端,因为样品是带负电荷,接通电源后,样品要在薄膜上向正极泳动；确定薄膜的无光泽面朝下.
2．点样时,要控制点样点的大小在直径为2~3mm,样点不可太大,否则电泳后观察结果不理想.