实时荧光定量PCR的结果该怎样分析?为什么最好不用Syber Green？
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/15 11:54:09
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实时荧光定量PCR的结果该怎样分析?为什么最好不用Syber Green？
实时荧光定量PCR的结果该怎样分析?
为什么最好不用Syber Green？
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如果有标准曲线,按照标准曲线计算.
一般都是相对量.则用delta delta CT方法来计算.举例如下：
对照组基因A的CT值为20,内参（比如βactin)CT值15.实验组基因A CT值18,内参CT值14.
首先算加样量：delta CT=15-14=1.2的1次方是2.也就是说实验组的加样量是对照组的2倍.
基因A:delta CT=20-18=2.2的2次方是4.也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍.但是由于加样量是2倍,所以4处以2=2,最后的相对量是2倍.
几点注意：
1.必须确定扩增的特异性
2.只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同）
3.2的某次方只是理论值,实际扩增效率低于2.
4.最好不用Syber Green
看CT值、起始拷贝数、标准偏差等
如果是SYBR做的话，再看下溶解曲线
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