如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆人的P53基因?并作最终鉴定.人的P53基因可从人细胞的mRNA中获取.
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/08 04:40:04
如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆人的P53基因?并作最终鉴定.人的P53基因可从人细胞的mRNA中获取.
如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆人的P53基因?并作最终鉴定.
人的P53基因可从人细胞的mRNA中获取.
如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆人的P53基因?并作最终鉴定.人的P53基因可从人细胞的mRNA中获取.
就是利用基因工程
首先提取目的基因 从细胞的信使RNA中提取出P53基因
构建基因表达载体 将目的基因P53和载体-大肠杆菌质粒重组
将目的基因导入受体细胞 可以选择大肠杆菌或动植物细胞作为受体细胞,导入重组DNA
检测和鉴定 可采用发射性同位素标记法检测P53
方法1;这个蛋白很普遍，应该有相当多的实验有现成的质粒，直接去求就可以。去NCBI上搜索一下，这类的文章非常多。
方法2:自己构建时，主要将你从人源细胞系中抽提总mRNA,然后反转录。
将反转录的总cDNA作为模板，通过PCR 特异的P53引物，克隆出这个基因
然后凝胶电泳分离纯化PCR产物；然后将该PCR产物插入到带有抗性的大肠杆菌质粒中。
涂板后，筛选阳性克...
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方法1;这个蛋白很普遍，应该有相当多的实验有现成的质粒，直接去求就可以。去NCBI上搜索一下，这类的文章非常多。
方法2:自己构建时，主要将你从人源细胞系中抽提总mRNA,然后反转录。
将反转录的总cDNA作为模板，通过PCR 特异的P53引物，克隆出这个基因
然后凝胶电泳分离纯化PCR产物；然后将该PCR产物插入到带有抗性的大肠杆菌质粒中。
涂板后，筛选阳性克隆数个，再用酶切作鉴定，找到合适的质粒；
最后再将该质粒进行测序。确定该质粒无突变。
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首先是活的cDNA： 提取细胞总RNA→设计引物，反转录PCR得到P53的cDNA→凝胶电泳并回收目的片段→纯化→将纯化后的片段与T载体连接(16℃ 过夜)→转化JM109感受态细胞→涂布氨苄抗性平板→37℃ 过夜培养→挑取转化子→菌落PCR验证→电泳分析得到阳性转化子→将阳性转化子接种LB培养基37℃培养过夜→收集菌体→提取质粒→得到P53基因的克隆载体。...
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首先是活的cDNA： 提取细胞总RNA→设计引物，反转录PCR得到P53的cDNA→凝胶电泳并回收目的片段→纯化→将纯化后的片段与T载体连接(16℃ 过夜)→转化JM109感受态细胞→涂布氨苄抗性平板→37℃ 过夜培养→挑取转化子→菌落PCR验证→电泳分析得到阳性转化子→将阳性转化子接种LB培养基37℃培养过夜→收集菌体→提取质粒→得到P53基因的克隆载体。
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mRNA很容易分解的~~~很难提取 如果你能提取到,首先逆转录PCR合成cDNA 将cDNA转入质粒中(用限制性内切酶酶切) 再将重组质粒导入大肠杆菌