western blot转膜不完全怎么办?Fas蛋白转膜,湿转,350mA,60分钟,转膜后染胶仍然有条带；后进行80、90分钟,还是转膜不完全.时间还可以延长吗?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/25 00:31:38
western blot转膜不完全怎么办?Fas蛋白转膜,湿转,350mA,60分钟,转膜后染胶仍然有条带；后进行80、90分钟,还是转膜不完全.时间还可以延长吗?
western blot转膜不完全怎么办?
Fas蛋白转膜,湿转,350mA,60分钟,转膜后染胶仍然有条带；后进行80、90分钟,还是转膜不完全.时间还可以延长吗?
western blot转膜不完全怎么办?Fas蛋白转膜,湿转,350mA,60分钟,转膜后染胶仍然有条带；后进行80、90分钟,还是转膜不完全.时间还可以延长吗?
个人建议时间不要再长了,再长蛋白有可能变性造成后续实验无法进行.我原来遇到这类问题是用以下几种方法尝试解决的,你也可以尝试一下
（1）检查一下你的三明治结构夹的怎么样,尤其是膜及滤纸的边缘是不是有短接的地方,这个是最容易出现的问题.另外膜和胶之间是不是有气泡,不推荐用外力去擀压膜和胶,推荐用缓冲液润湿膜和胶之后,像做切片盖盖玻片一样从一边盖下赶出气体.要绝对确保没有短接和气泡,不然很容易出现转膜不完全的问题.
（2）换成恒压的试试,这个方案我不知道原理是什么,但是有的时候确实能够解决问题.
（3）换成半干转的方法,但是注意半干转更要确保没有短接气泡,而且时间不能过长,半干转的发热量很大.我不清楚你的蛋白是不是需要活性,如果遇热失活那就不能用这种方法.
（4）这个方法比较浪费,看老板让不让你用了.换成品缓冲液商品,西格玛的比较好.另外换24层滤纸成品,用一次不要再使用第二次.还有就是还一个牌子的膜,我们实验室曾经遇到过一个牌子的膜完全转不出来的现象.
以上,希望你的问题早日能够解决.
转膜时间主要是看分子量，看看你的目的蛋白分子量是多少，还有就是我在转120KD的分子时，用时2h30min，胶上还有maker，但是用该膜做目的蛋白还是可以的。