双脱氧法DNA测序的基本原理是什么
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/26 17:46:25
双脱氧法DNA测序的基本原理是什么
双脱氧法DNA测序的基本原理是什么
双脱氧法DNA测序的基本原理是什么
DNA测序技术,即测定DNA序列的技术.在分子生物学研究中,DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础.目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和 Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法.这二种方法在原理上差异很大,但都是根据核苷酸在某一固定的点开始,随机在某一个特定的碱基处终止,产生 A,T,C,G四组不同长度的一系列核苷酸,然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测,从而获得DNA序列.目前 Sanger测序法得到了广泛的应用.
Sanger 法测序的原理就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物.直到掺入一种链终止核苷酸为止.每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP).由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止.终止点由反应中相应的双脱氧而定.每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物.它们具有共同的起始点,但终止在不同的的核苷酸上,可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用X- 光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测.
Sanger法测序是酶法测序可我问的是双脱氧法测序啊Sanger双脱氧链终止法(酶法)测序程序 操作程序是按DNA复制和RNA反转录的原理设计的。 1.分离待测核酸模板，模板可以是DNA，也可以是RNA，可以是双链，也可以是单链。 2.在4只试管中加入适当的引物、模板、4种dNTP(包括放射性标记dATP，例如?32 PdATP和DNA聚合酶（如以RNA为模板，则用反转录酶），再在...
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Sanger法测序是酶法测序
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将四条一样DNA放到四个相同的试管，四（1，2，3，4）个试管原料的组成为：dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddATP；dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddGTP；dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddCTP；dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddTTP。这样在1，2，3，4试管中遇到A，G，C,T碱基就会有继续或停下两种可能，所以产生不同的片段。然后再电泳，根据各个片...
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将四条一样DNA放到四个相同的试管，四（1，2，3，4）个试管原料的组成为：dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddATP；dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddGTP；dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddCTP；dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddTTP。这样在1，2，3，4试管中遇到A，G，C,T碱基就会有继续或停下两种可能，所以产生不同的片段。然后再电泳，根据各个片段的长短，读出序列。
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