请问大肠杆菌一定有质粒吗?我们用来做转化的DH52有质粒吗我将DH52直接用来提质粒也能提得到,这是正常的吗?

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 08:00:49
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请问大肠杆菌一定有质粒吗?我们用来做转化的DH52有质粒吗我将DH52直接用来提质粒也能提得到,这是正常的吗?
请问大肠杆菌一定有质粒吗?我们用来做转化的DH52有质粒吗
我将DH52直接用来提质粒也能提得到,这是正常的吗?

请问大肠杆菌一定有质粒吗?我们用来做转化的DH52有质粒吗我将DH52直接用来提质粒也能提得到,这是正常的吗?
表达不清

大肠杆菌质粒DNA的提取
质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术,但提取方法有很多种,以下介绍一种最常用的方法:
碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:
1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。
2、37℃振荡培养过夜。
3、取1.5ml...

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大肠杆菌质粒DNA的提取
质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术,但提取方法有很多种,以下介绍一种最常用的方法:
碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:
1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。
2、37℃振荡培养过夜。
3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3min,弃上清液。
4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。
5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH,1% SDS),轻轻翻转混匀,置于冰浴5 min .
6、加入0.15m1预冷溶液III(5 mol/L KAc,pH4.8),轻轻翻转混匀,置于冰浴5 min .
7、以10,000rpm离心20min,取上清液于另一新Ep管
8、加入等体积的异戊醇,混匀后于?0℃静置10min.
9、再以10,000rpm离心20min,弃上清。
10、用70%乙醇0.5ml洗涤一次,抽干所有液体。
11、待沉淀干燥后,溶于0.05mlTE缓冲液中
煮沸法
1、将1.5ml培养液倒入eppendorf管中,4℃下12000g离心30秒。
2、弃上清,将管倒置于卫生纸上几分钟,使液体流尽。
3、将菌体沉淀悬浮于120ml STET溶液中, 涡旋混匀。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 涡旋振荡3秒钟。
5、将eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量离心机4℃下12000g离心10分钟。
7、用无菌牙签从eppendorf管中去除细菌碎片。
8、取20ml进行电泳检查。
[注意] 1. 对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒DNA.
2. 煮沸法中添加溶菌酶有一定限度,浓度高时,细菌裂解效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。
3. 提取的质粒DNA中会含有RNA,但RNA并不干扰进一步实验,如限制性内切酶消化,亚克隆及连接反应等

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请问大肠杆菌一定有质粒吗?我们用来做转化的DH52有质粒吗我将DH52直接用来提质粒也能提得到,这是正常的吗? 大肠杆菌里面有质粒吗?如果大肠杆菌有质粒的话,那做转化的感受态细胞里有没有质粒啊?如果有质粒是不是也有抗性基因?那蓝白筛选还有意义吗? 大肠杆菌都有质粒吗? 质粒转化大肠杆菌的目的? 大肠杆菌DH5α有质粒吗我们做了SDS裂解法提取大肠杆菌DH5α中的基因组DNA的实验,我想问一下,这个菌株中没有质粒DNA的干扰吗? 重组质粒转化大肠杆菌注意事项(用热击法). Clontech试剂盒的质粒如何长期保存?是转化大肠杆菌后保存含有质粒的菌种吗?还是转化酵母? 大肠杆菌质粒一般有多大 用氯化钙法将质粒DNA转入大肠杆菌实验中,转化成功的关键有哪些? 摇菌菌液摇老了会有什么影响?我做的是大肠杆菌的质粒的提取,菌液摇老了会有影响吗 用氯化钙法将质粒DNA转化入大肠杆菌实验中,转化成功的关键因素有哪些? 大肠杆菌转化后长得很慢,提质粒跑电泳条带很淡我是用的一种基因缺陷性大肠杆菌做感受态,然后将连接好的质粒转入(连好的质粒里含有缺少的基因片段),涂平板以后需要24h才有菌落长出,挑 大肠杆菌可以直接做PCR吗农杆菌的菌液可以直接作为PCR的模板,请问大肠杆菌可以吗?就是说,可否省略从大肠杆菌提取质粒的步骤. 转化到大肠杆菌中的质粒会甲基化吗?看到文献说大肠杆菌中的质粒会甲基化,那么用T载体与目的片段连接后转化到大肠杆菌中,会被甲基化吗?急, 大肠杆菌质粒反复冻融对质粒有什么影响 关于大肠杆菌中的质粒大肠杆菌中的质粒可用于基因工程,那么质粒在大肠杆菌里有什么用? 质粒转化大肠杆菌后涂平板长出的菌落出现较规则的大小两种菌落 可以继续进行质粒提取吗? 请问:做微生物质粒转化耐药试验的有关问题.请问:做微生物质粒转化耐药试验有否传染的危险?