大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?以下是我的步骤：猪瘟疫苗216bp片段克隆 1、PMD-18T vector 1ul 216bp胶回收产物 4ul2、加入5ul的SolutionⅠ3、16℃连接过夜（大约20h)感受态细胞的DN
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/28 22:51:08
大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?以下是我的步骤：猪瘟疫苗216bp片段克隆 1、PMD-18T vector 1ul 216bp胶回收产物 4ul2、加入5ul的SolutionⅠ3、16℃连接过夜（大约20h)感受态细胞的DN
大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?
以下是我的步骤：
猪瘟疫苗216bp片段克隆
1、PMD-18T vector 1ul
216bp胶回收产物 4ul
2、加入5ul的SolutionⅠ
3、16℃连接过夜（大约20h)
感受态细胞的DNA转化：
1.制备好的感受态细胞从—70℃冰箱取出后在冰水混合物中融化10min
2.取100ul感受态细胞,置于1.5ml离心管中.
3.向感受态内加入5ul连接过夜的DNA,轻轻混匀后冰中放置30min.
4.42℃90s,立即入冰中2min.
5.加入1ml37℃的预温营养肉汤.
6.37℃,120r/min,1h培养.（在1.5ml里装着）
7.4000rpm,4℃,离心2min后,取出100ul涂于Amp板上.（Amp是按1/1000的量加入普琼上的）.
8.过了18h 都没长.
大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?以下是我的步骤：猪瘟疫苗216bp片段克隆 1、PMD-18T vector 1ul 216bp胶回收产物 4ul2、加入5ul的SolutionⅠ3、16℃连接过夜（大约20h)感受态细胞的DN
当然要先用液态不加抗生素的LB复苏好不好.
不要纠结在转化涂板的过程上 要么就是你的质粒酶切完后回收的片段不对 要么就是你的胶回收产物不对
转化实验为什么要先用液态的LB后用固态的培养基呢? 转化实验用液态的LB一般经37度倒置培养12-16h后，就可以看到有单个克隆长出，就可挑取了。 ..
你用什么酶做的PCR？连T载体末端必须有A
感受态还有没有用？最好转个质粒验证一下，做这个感受态是非常重要的。
胶回收的时候有没有把wash buffer 蒸发干净？