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来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/26 04:35:02
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求大神翻译为英文:植物叶片经液氮研磨,可使细胞壁破裂,加入去污剂(如CTAB),可使核蛋白体解析,然后使蛋白和多糖杂质沉淀,DNA进入水相,再用酚、氯仿抽提纯化.本实验采用CTAB法,其主要作用是破膜.CTAB是一种非离子去污剂,能溶解膜蛋白与脂肪,也可解聚核蛋白.植物材料在CTAB的处理下,结合 65℃ 水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA 被释放出来.CTAB与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7mM)浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0.1-0.5mM NaCl)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中.经过氯仿 / 异戊醇 (24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA,最后经异丙醇或乙醇等沉淀剂将DNA沉淀分离出来.
由于核酸、蛋白质、多糖在特定的紫外波长都有特征吸收.核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm.纯的DNA样品A260/280≈1.8,纯的RNA样品A260/280≈2.0,并且1μg/ml DNA溶液A260=0.020.
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植物叶片经液氮研磨,可使细胞壁破裂,加入去污剂(如CTAB),可使核蛋白体解析,然后使蛋白和多糖杂质沉淀,DNA进入水相,再用酚、氯仿抽提纯化.本实验采用CTAB法,其主要作用是破膜.CTAB是一种非离子去污剂,能溶解膜蛋白与脂肪,也可解聚核蛋白.植物材料在CTAB的处理下, 结合 65℃ 水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA 被释放出来.CTAB与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7mM)浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0.1-0.5mM NaCl)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中.经过氯仿 / 异戊醇 (24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA,最后经异丙醇或乙醇等沉淀剂将DNA沉淀分离出来.
Plant leaves by grinding in liquid nitrogen, can make the cell wall broken, adding detergent (such as CTAB), can make nuclear protein analysis, and then theprotein and polysaccharide impurity precipitation, DNA into the aqueous phase,and phenol chloroform extraction, purification. This experiment adopts the CTABmethod, its main role is to rupture of membranes. CTAB is a nonionic detergent,can dissolve the membrane protein and fat, can also be depolymerized nuclearprotein. Plant materials in CTAB treatment, combined with 65 ℃ water bath to cell lysis, protein denaturation, DNA is released. CTAB and nucleic acid complexes, thecomplexes in high salt (>0.7mM) concentration and soluble, stable, but at low salt concentration (0.1-0.5mM NaCl) CTAB- nucleic acid complexes because ofreduced solubility and precipitation, and most of the protein and polysaccharide isdissolved in solution. By chloroform / isoamyl alcohol (24:1) extraction to remove proteins, polysaccharides, pigments for purification of DNA, and finally by isopropyl alcohol or ethanol as precipitant DNA precipitation separated.
由于核酸、蛋白质、多糖在特定的紫外波长都有特征吸收.核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm.纯的DNA样品A260/280≈1.8,纯的RNA样品A260/280≈2.0,并且1μg/ml DNA溶液A260=0.020.
Because the nucleic acid, protein, polysaccharide has the characteristic absorptionin the UV wavelength specific. Nucleic acid and its derivative UV absorption peak at 260nm. Pure DNA samples with A260/280 ≈ 1.8, pure RNA sample A260/280 ≈ 2,and 1 μ g/ml DNA solution A260=0.020