基因工程在将载体送入受体细胞时还要对受体细胞表面进行处理吗?具体怎么处理啊
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2025/02/03 19:27:57
基因工程在将载体送入受体细胞时还要对受体细胞表面进行处理吗?具体怎么处理啊
基因工程在将载体送入受体细胞时还要对受体细胞表面进行处理吗?具体怎么处理啊
基因工程在将载体送入受体细胞时还要对受体细胞表面进行处理吗?具体怎么处理啊
首先受体细胞有三种类型,包括植物细胞、动物细胞、微生物.其中在高中选修课本三的基因工程中仅介绍了微生物的处理方法,即将大肠杆菌培养在钙离子的溶液中,使其细胞膜的通透性增加,从而使运载体进入受体细胞.具体处理方法可用百度收索“感受态细胞”.希望对你有所帮助.
如果运载体是质粒,受体细胞是细菌,一般对细菌用一定浓度的氯化钙处理,以增大细菌细胞壁的通透性。
感受态细胞(competent cell):理化方法诱导细胞,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。
CaCl2法:
操作:
1.将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀,同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞
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感受态细胞(competent cell):理化方法诱导细胞,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。
CaCl2法:
操作:
1.将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀,同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞
细胞膜通透性发生变化,极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基-磷酸钙复合物。
2.此时,将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激(90s),细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动,并随机出现许多间隙,外源DNA就可能被细胞吸收。进入细胞的外源DNA分子通过复制、表达,实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。
3.将转化后的细胞在选择性培养基上培养,筛选出带有外源DNA分子的阳性克隆。
意义:
将构建好的载体转入感受态细胞进行表达,不仅可以检验重组载体是否构建成功,最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验,如蛋白质表达纯化等工作。
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