蛋白质的分子量在120KD,做western blot 跑胶时,用多大浓度的胶,蛋白每孔上样量是多少?我做的蛋白分子量在120KD,砸出来的结果是很细很浅的,
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 23:28:14
蛋白质的分子量在120KD,做western blot 跑胶时,用多大浓度的胶,蛋白每孔上样量是多少?我做的蛋白分子量在120KD,砸出来的结果是很细很浅的,
蛋白质的分子量在120KD,做western blot 跑胶时,用多大浓度的胶,蛋白每孔上样量是多少?
我做的蛋白分子量在120KD,砸出来的结果是很细很浅的,
蛋白质的分子量在120KD,做western blot 跑胶时,用多大浓度的胶,蛋白每孔上样量是多少?我做的蛋白分子量在120KD,砸出来的结果是很细很浅的,
10%的分离胶,20ul上样量
我用7%胶。分辨率还可以。
加多少样品要看抗体了。不过,一般WB能测到0.3ng的水平。不放心就用3ng (该蛋白)。
就用8%的,多点上样量
15% 15~45kDA
7.5% 30~120kDA
胶浓度越大,跑的蛋白分子量越小,你可以选择6%的,不过那样的话你就要跑就点,一般恒压140V跑。而且你的蛋白很浅应该不一定是跟胶有关,很多因素啊。也许你的抗体不是很好用(很细我不知道你什么意思,一般都是呈带状),或者你上的蛋白太少了,一般我都是30~50ug,就差不多了。
我看过了 你的蛋白才6ug,太少了 至...
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15% 15~45kDA
7.5% 30~120kDA
胶浓度越大,跑的蛋白分子量越小,你可以选择6%的,不过那样的话你就要跑就点,一般恒压140V跑。而且你的蛋白很浅应该不一定是跟胶有关,很多因素啊。也许你的抗体不是很好用(很细我不知道你什么意思,一般都是呈带状),或者你上的蛋白太少了,一般我都是30~50ug,就差不多了。
我看过了 你的蛋白才6ug,太少了 至少要30ug,你的裂解液少加点,或者细胞种多点
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采用10%的分离胶效果较好。你的带细而浅,可能存在以下原因:1.样品浓度较低。可先对样品浓缩后,再上样。2.转膜时间。分子量越大,时间越长。时间短,则转膜不彻底,时间太长,容易穿透,建议采用4℃过夜。3.抗体浓度太低或效果不好。1:500-1:5000适当调整。...
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采用10%的分离胶效果较好。你的带细而浅,可能存在以下原因:1.样品浓度较低。可先对样品浓缩后,再上样。2.转膜时间。分子量越大,时间越长。时间短,则转膜不彻底,时间太长,容易穿透,建议采用4℃过夜。3.抗体浓度太低或效果不好。1:500-1:5000适当调整。
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可能你的蛋白含量很低。最好配的浓度再高点。你用的βactin条带清晰吗?目的蛋白在细胞内可能本来就表达的很少吧也许