琼脂糖凝胶电泳实验失败原因?实验首先是用PCR扩增DNA片段,然后用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物的量,结果失败了,EB染色后凝胶上没有出现亮带.请教各位牛人这些步骤里面可能出现问题的在哪里

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/22 15:57:23
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琼脂糖凝胶电泳实验失败原因?
实验首先是用PCR扩增DNA片段,然后用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物的量,结果失败了,EB染色后凝胶上没有出现亮带.请教各位牛人这些步骤里面可能出现问题的在哪里?

琼脂糖凝胶电泳实验失败原因?实验首先是用PCR扩增DNA片段,然后用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物的量,结果失败了,EB染色后凝胶上没有出现亮带.请教各位牛人这些步骤里面可能出现问题的在哪里
可能性太多了.
1.你跑胶一般都要放MARKER或者叫DNA LADDER吧,这个MARKER除外对DNA标记大小以外,还可以用来监控ELECTROPHORESIS的质量,如果MARKER显示而DNA没显示,说明ELECTROPHORESIS正常而DNA有问题,如果MARKER和DNA都没有显示,说明是你的电永出现了问题.
ELECTROPHORESIS的可能问题有,1.ELECTROPHORESIS BUFFER浓度问题,2.BUFFER太陈旧了从而失效 3.跑过了（根据SIZE来看）
2.如果证明是DNA复制也就是PCR的问题,可能性就太多了.
具体包括你所使用的PCR
BUFFER：浓度问题（需要1X）,盐析问题（有时候放置太久其中的SALT会析出,溶解不透彻就会失效）,氯化镁浓度问题.
DDNTP：浓度问题（可能配得浓度不够）,陈旧性问题.
TAQ：你的酶有可能失效.
PRIMER问题：你的PRIMER可能NOT WORK.也可能你的ANNEALING TEM有问题,初次使用PRIMER的时候建议作温度的GRADIANT TEST,测试最佳ANNEALING TEM.PRIMER也可能太陈旧了,浓度或高或低.PRIMER容易行程DIMER.
PCR PROGRAMME的设置问题：这个最简单,建议仔细过一遍.
总之,如果是PCR的问题,建议每次保持其他不变,只改变其中的一项来把问题找出来,另外提醒你最好要作POSITIVE 和NEGATIVE CONTROL.

再降低一些温度，延长一些反应时间试试。再不行就是缓冲液隔久了或是胶浓度不对。

能不能看到Marker?
如果有Marker而没有你的目的条带就是PCR失败了

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