蛋白质,核酸,酶在分离纯化的时候为了防止变性应该注意什么?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/08 11:03:56
蛋白质,核酸,酶在分离纯化的时候为了防止变性应该注意什么?
蛋白质,核酸,酶在分离纯化的时候为了防止变性应该注意什么?
蛋白质,核酸,酶在分离纯化的时候为了防止变性应该注意什么?
蛋白质与核酸分离纯化的时候,需要注意的地方是不同的.对于蛋白质,尤其是酶类首先要注意的就是温度,很多蛋白质都是热敏感性的,你必须要注意低温操作,所有的步骤最好是在4度的环境下进行.接着要注意的就是避免使用一些会造成蛋白质变性的试剂,比如说重金属盐,有机试剂.严格意义上来说,要提取活性酶,任何可能使蛋白质沉淀的试剂和方法都要避免使用.最好就是直接在液体环境下进行,比较理想的方法就是色谱柱层析.然后,实际上为了防止蛋白质在提取过程中被释放的内源性蛋白酶（木瓜蛋白酶,枯草蛋白酶等等）降解蛋白质,还需要在提取环境中加入适当的蛋白酶抑制剂.
对于核酸,DNA和RNA分离的时候要求也不同.对于DNA,这是一种非常稳定的物质,一般来说只要防止内源性的DNA酶降解,目前发现的DNA酶都需要二价金属离子辅助的（如镁离子,钙离子）,所以加入二价金属离子螯合剂EDTA就可以抑制DNA酶的活性.DNA提取纯化过程中最主要的问题就是长链DNA的物理损伤,所以操作过程中一定要轻柔,忌剧烈振荡.
对于RNA分子,RNA分子是一类非常不稳定的物质.而且对RNA酶特别敏感,而RNA酶是一种无处不在的酶,灰尘与空气以及人体的唾液和皮肤都有RNA酶的存在,而且RNA酶是一种非常稳定的酶,强酸强碱以及一般高温高压灭菌程序都不能使其彻底变性,而且它并不需要任何辅助因子就能发挥酶活性.所以在提取过程中,所有器材都需要灭RNA酶处理（0.1%DEPC水浸泡过夜,再灭菌处理）.整个提取过程中戴手套操作,并且手套要经常换.避免在实验过程中说话.
那要看你是提酶还是核酸了 提酶的话就小心有机溶剂和温度之类的. 提提RNA的话有的时候还不能说话, 尤其是mRNA, 而且要动作快, 防止唾液里的
莱特莱德为您 果汁分离浓缩是一种新型的果汁制备技术，传统的果汁加工技术主要存在着四个技术方面的难题，分别是果汁颜色的改变、果汁营养成分的流失、果汁香体成分的流失、果汁澄清程度不理想。这四个问题曾经一度成为果汁加工行业的瓶颈。 现代新型的果汁分离浓缩技术采用的是膜分离技术。和传统的果汁分离澄清技术相比较，现代新型的果汁浓缩分离膜技术优点非常多，这种膜技术能够在正常温度或者是超低温的环境下进行果汁浓缩处理，并且处理之后的果汁不会出现任何的性质变化，与此同时，果汁中的营养成分以及果汁中的香体成分不会出现任何的流失。 特种分离设备 酶解过程是唯一能够对果汁分离浓缩膜技术产生影响的一个因素，在一定的处理条件下，利用反渗透膜工艺能够对果胶含量不多的果蔬汁直接进行相应的浓缩分离处理，并且精确计算的话，果蔬汁的浓缩分离倍数超过十倍以上。 综上所述，果胶含量高的果蔬汁必须事先通过酶解果胶物质脱出处理之后才能进行果汁分离浓缩操作，但是对于种类不同的果蔬汁而言，酶解后的效果也不一样。
温性浓