博凌科为 SYBR Green具有什么样的特点 具体操作方法是怎样的?

博凌科为 SYBR Green具有什么样的特点 具体操作方法是怎样的?
博凌科为 SYBR Green具有什么样的特点 具体操作方法是怎样的?

博凌科为 SYBR Green具有什么样的特点 具体操作方法是怎样的?
博凌科为 SYBR Green
　　SYBR Green I核酸染料(电泳用)
　　SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单：无须脱色或冲洗.至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍.SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低.可适用于多种电泳分析.
　　SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳,脉冲电场凝胶电泳,和毛细管电泳等.
　　SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高,因此可以用做电泳前染色,对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用.另外,SYBR Green I 与EB相比,诱变能力大大降低.
　　SYBR Green I 核酸染料特点
　　◆ 高灵敏：至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍.
　　◆ 信噪比高：样品荧光信号强,背景信号低.
　　◆ 操作简单：无须脱色或冲洗.
　　◆ 适用范围广：可适用于多种电泳分析.
　　◆ 使用方便：不影响其它修饰酶作用.
　　◆ 经济：价格比银染便宜.
　　电泳用SYBR Green I 使用方法
　　SYBR Green I预染方法
　　◆ 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳
　　◆ 工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍,即为SYBR GreenⅠ工作液.SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上.
　　◆ 制胶：按常规方法制胶,不含任何染料.
　　◆ 样品染色：向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合.SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10.
　　◆ DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和5μL DNA Marker稀释液和1μLSYBR GreenⅠ工作液混匀,室温放置5分钟,使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合.
　　◆ 上样、电泳：按常规操作.
　　SYBR Green I后染方法
　　◆ 按照常规方法进行电泳.
　　◆ 用PH 7.0 - 8.5 的缓冲液（如：TAE,TBE 或 TE）,按照10000：1的比例稀释SYBR GreenⅠ浓缩液,混匀,制成染色溶液.
　　◆ 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光.室温振荡染色10-30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定.聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上,让工作液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟.玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）.
　　◆ 用蓝盾TM观测.蓝光可透过玻璃,观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入蓝盾TM内观测.
　　SYBR Green I使用注意事项
　　◆ 在”SYBR GreenⅠ预染色方法”中,电泳时间不要超过2小时,否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带.
　　◆ 在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SYBR Green I可以全部从双链核酸上去掉.
　　◆ 如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行 Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1%- 0.3% 的SDS.
　　◆ 在紫外照射透视下,与双链 DNA 接合的 SYBR Green I 呈现绿色荧光.如果胶中含有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色.
　　◆ SYBR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力.建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器.
　　SYBR Green I荧光定量PCR
　　SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800-1000倍.在PCR反应体系中,加入过量SYBR Green I荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,荧光信号增强,而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步.荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定.